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SDS-PAGE,蛋白轉印,western Blot試劑配制
發布日期:2022-06-21 10:10:50


SDS-PAGE,蛋白轉印,western Blot試劑配制


1.5 mol/L Tris (PH8.8)


1.稱量181.7g Tris置于1L燒杯中。


2.加入約800 ml去離子水,充分攪拌溶解。


3.用濃鹽酸調節pH值至8.8。


4.定容至1L.


5.高壓滅菌后,室溫保存


注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1oC,溶液的pH值大約降低0.03個單位。

(參照kara公司Catalog-N1)


1 mol/L Tris (PH6.8)


1.稱量121.1g Tris置于1L燒杯中。


2.加入約800 ml去離子水,充分攪拌溶解。


3.按下表量加入濃鹽酸調節所需的pH值。

pH值 濃HCl
6.8
7.4 約70 ml
7.6 約60 ml
8.0 約42 ml

4.定容至1L.


5.高壓滅菌后,室溫保存。


注意:1.溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1oC,溶液的pH值大約降低0.03個單位。2. 如1 mol/L溶液呈現黃色,應予丟棄,并置備質量更好的Tris。


(參照kara公司Catalog-N1)


30%丙稀酰胺(100ml)


1.稱量下列試劑置于燒杯中。
丙烯酰胺(Acrylamide) 29 g
雙丙烯酰胺 (BIS) 1 g


2.加入約60 ml去離子水,充分攪拌溶解。


3.定容至100 ml, 用0.45 μm濾膜濾去雜質。


4.于棕色瓶中4 oC保存。

注意:1. 丙烯酰胺具有很強的神經毒性,并可通過皮膚吸收,其作用具有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成分。


(參照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924)


30% SDS


1.稱量10 g 高純度(電泳級)的SDS置于100~200 ml燒杯中。


2.加入約800 ml去離子水,68oC加熱溶解。


3.滴加數滴濃鹽酸調節pH值至7.2。


4.定容至100 ml,室溫保存。

(參照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924)





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