細胞的纖毛和鞭毛

原理

暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線直接進入物鏡的照明方法。常常用它來觀察沒有染色的活體細胞或膠體粒子。利用此照明法，在鏡檢時不能直接看到通過標本的照明光線，只有被檢物體反射或衍射的光線進入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看到明亮的被檢物體的存在和運動，但它們的內部結構卻看不清楚。

材料與儀器

小白鼠
臺盼蘭 剛果紅
光鏡 注射器 載玻片 蓋玻片 解剖器材 滴管 移液管 試管 玻璃片

步驟

一、自制遮光板變普通顯微鏡為“簡單的暗視野顯微鏡”。

步驟：

1.  將顯微鏡聚光器調到最高位，用低倍鏡調焦至清楚。

2.  取下目鏡，從鏡筒中觀察并調節光圈的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。

3.  放一塊透明玻璃于載物臺透光孔上，用尺子測量光圈孔徑。

4.  按照圖1的形狀，用黑紙剪成與調節后光圈孔徑一樣大小的中央遮光板。

5.  將中央遮光板放置在顯微鏡的濾光框上，即可進行標本的暗視野觀察。

注：如果使用高倍鏡觀察標本時，應按高倍鏡調焦的視野大小重新制作中央遮光板。

圖1中央遮光板
a.  光圈孔徑
b.  濾光片直徑

二、觀察蟾蜍上頜粘膜上皮細胞的纖毛運動

步驟：

1.  用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍。

2.  腹部向上將蟾蜍固定在蠟盤上。

3.  沿蟾蜍二側口角向后剪開約1厘米，將下頜翻轉固定在腹部。

4.  在上頜中線距喉頭1厘米處放置臘屑，觀察臘屑向什么方向移動，記錄臘屑開始移動到消失的時間（見圖2蟾蜍口腔內面圖）。

5.  然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約2×2 cm2 小塊，用牙簽挑取剪下的粘膜，將縱切面貼于載片上。

6.  加一滴生理鹽水于載玻片標本上，加蓋玻片，鏡檢。

圖2    蟾蜍口腔內面圖

7.  結果：

（1）在低倍鏡下觀察上頜粘膜細胞纖毛運動的現象。

（2）換高倍鏡仔細觀察纖毛有規律的運動。

三、暗視野觀察蟾蜍精子的鞭毛運動

步驟：

1.  將前面實驗所用蟾蜍沿腹中線開腹，暴露出黃色圓柱狀精巢。

2.  剪取一側精巢于盛有自來水的平皿中，用鑷子夾住精巢的一端，清洗去血污。

3.  移取洗凈的精巢于另一干凈的平皿上，用眼科剪將精巢充分剪碎后，加入數滴自來水混勻。

4.  用吸管吸取平皿內液體，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，稍待2~3分鐘于鏡下觀察。

5.  結果：

（1）在低倍鏡下可見到視野中有許多精子：頭部呈長錐形，尾為細長的線狀結構。

（2）置高倍鏡下觀察：可見有許多靠尾部鞭毛彎曲擺動驅使而運動的精子，測量鞭毛長度。