線粒體的活體染色實驗
原理
活體染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠 B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態呈藍綠色,而在周圍的細胞質中染料被還原,成為無色狀態。
材料與儀器
兔子
顯微鏡 手術器材 解剖盤 平皿 載玻片 蓋玻片 吸水紙 注射器 吸管
詹納斯綠B染液 Ringer氏液
步驟
一、方法
1. 用空氣栓塞處死兔子,置于解剖盤內,迅速打開腹腔。
2. 取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊(2~3 mm3),放入盛有Ringer氏液的平皿內洗去血液(用鑷子輕壓)。
3. 用吸管吸去Ringer氏液,在平皿內加1/300詹納斯綠B染液,讓組織塊上表面露在染液外面,使細胞內線粒體的酶系可進行充分的氧化,這樣才有利于保持染料的氧化狀態,使線粒體著色。
4. 當組織塊邊緣染成籃色時即可,一般需要染30分鐘。
5. 染色后,將組織塊移到載片上,用鑷子將組織塊拉碎,就會有一些細胞或細胞群從組織塊脫離。
6. 將稍大的組織塊去掉,使游離的細胞或細胞群留在載片上,加一滴Ringer氏液,蓋上蓋片,吸去多余水分。
二、結果
顯微鏡觀察,肝細胞質中許多線粒體被染成藍綠色,呈顆粒狀。