人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒的應用
一、背景
人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒是一種基于酶聯免疫吸附法（ELISA）的檢測工具，用于測定血清、血漿和其他相關生物流體中Aβ1-42的濃度。
二、人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒的工作原理主要包括以下步驟
使用純化的人β淀粉樣蛋白1-42抗體包被微孔板，制成固相抗體。
向預先包被了抗人β淀粉樣蛋白1-42抗體的酶標孔中，加入標準品和樣本，溫育后，再加入生物素標記的抗β淀粉樣蛋白1-42抗體（或HRP標記的Aβ1-42抗體），形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。
經過徹底洗滌后，加入底物TMB進行顯色。TMB在酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）呈正相關。使用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過繪制標準曲線計算出樣本中Aβ1-42的濃度。
三、人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒操作步驟
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜,37℃反應60分鐘。
3、溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
4、每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液）100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5、溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
6、依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7、依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8、用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。
四、在使用人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒時，需要注意以下事項
嚴格按照試劑盒的說明書進行操作，確保實驗的準確性和可靠性。
樣本的收集和保存應遵循適當的方法，避免溶血、高血脂等因素對實驗結果的影響。
試劑的保存和使用應遵守相應的規定，避免試劑的污染和失效。
實驗過程中應注意安全，避免直接接觸有毒或有害的試劑。
五、應用
人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒可以用于冠心病患者SYNTAX評分與人β淀粉樣蛋白1-42的相關性臨床研究：
探索臨床冠心病患者SYNTAX評分與人β淀粉樣蛋白1-42的相關性。
方法：對我院2019年11月至2020年12月就診的129例同時完成冠狀動脈造影(Coronary Angiogram,CAG)和人β淀粉樣蛋白1-42(Amyloid-β1-42,Aβ1-42)抽血人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒檢查的患者進行回顧性分析。根據查看CAG圖像的結果,對這129例冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)患者進行SYNTAX評分(SYNTAX Score),SYNTAX評分由SYNTAX官方網站上的計算器計算所得。首先確定后降支血管的來源,從而區分左右優勢冠脈;其次,對心臟冠狀動脈系統的主要分支病變進行加權計算得分,并在有分叉、鈣化、血栓形成、彌漫性病變等特殊病變時進行額外的加分,根據得分,將其分為SYNTAX評分低分組(0-22分)、SYNTAX評分中分組(23-32分)、SYNTAX評分高分組(≥33分)。分組結果為低分組共44例(男34例、女10例);中分組共48例(男30例、女18例);高分組共37例(男32例、女5例)。采用統計軟件SPSS 25.0進行數據的統計分析,對SYNTAX低、中、高三組間的Aβ1-42、其它臨床生化指標及基線資料的情況進行分析比較。
