同步優于G1/S期

材料與儀器

細胞培養物
胸苷
流式細胞計量儀

步驟

一、雙胸苷同步化法

1. 往指數生長期細胞培養物中加入 2 mmol/L 的胸苷，孵育 12 小時。

2. 600 g 離心，去含胸苷培養基，換上正常培養基輕輕重懸細胞，讓細胞生長 10~12 小時使完全走出 S 期。

3. 加入胸苷至 2 mmol/L，孵育 12~14 小時。

4. 600 g 離心，去含胸苷培養基，換上正常培養基釋放同步化細胞。

5. 取樣，用流式細胞計量儀監測細胞通過 S 期的進程。

二、含羞草氨酸俘獲法

1. 往指數生長期細胞中加入腺苷至終濃度為 2 mmol/L，孵育 12 小時。

2. 600 g 離心，去含胸苷培養基，用正常培養基輕輕重懸細胞，培養 10~12 小時讓其走完 S 期。

3. 加入終 400 μm 的含羞氨酸終止細胞生長。

4. 繼續培養 12~14 小時，讓細胞走完 G1 期，止于 G1/S 邊境。

5. 撤換含羞草氨酸培養基，于 37℃ 用 DMEM 培養基洗涮細胞，加入預溫至 37℃ 的完全生長培養基讓細胞釋放生長。

6. 取樣，用流式細胞計量儀監測細胞通過 S 期的進程。