離心洗脫法

材料與儀器

細胞
洗脫離心機 培養基 錐形瓶 洗脫儀

步驟

1. 準備下列儀器：

洗脫離心機

裝有一個大容器中的 20 L 培養基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室溫

20 個 1 L 的錐形瓶，用以收集各洗脫組分

2. 至少提前 10 天開始培養細胞，進行離心洗脫時細胞連續進入指數生長期且不會達到太大的飽和度。

3. 按洗脫儀提供的說明，安裝轉頭和離心機，加入去離心水啟動整個系統。

4. 細胞裝在 1 L 的瓶子中，600 g，離心 25 分鐘。

5. 倒盡上清，合并所有的細胞沉淀至一支 50 ml 規格的管中，終體積 40~50 ml。

6. 將上述濃縮的細胞懸液通過一支裝有 18# 針頭的注射器，打散細胞團塊。

7. 顯微鏡檢查細胞，如果有必要，用更小的針頭重復處理直至大于 95% 的是單細胞。

8. 往洗脫系統中泵入含 0.5%~1% FCS 的培養基。

9. 參考洗脫儀附帶的說明進行適當的細胞注入操作。

10. 首先分離個體小的 G1 期細胞，慢慢提高流速。

11. 當細胞室內看起來似乎沒有什么細胞時，停止轉頭，維持流速，洗脫出殘余的細胞。

12. 一邊洗脫，一邊用 Channelyzer 計數細胞和測量細胞大小。洗脫完畢，有必要分析各組細胞所位于的細胞周期的哪一階段。