用分離的亞細(xì)胞組分進(jìn)行激酶分析

材料與儀器

細(xì)胞器樣品
激酶分析緩沖液 ATP
SDS-PAGE 凝膠

步驟

1. 準(zhǔn)備反應(yīng)混合物：反應(yīng)體積通常是 50~100 ml。

5X 激酶分析緩沖液                              10 μl

[γ-32P] ATP（終濃度 5 μCi/5μmol/L)      5 μl

水                                                       0~35 μl

細(xì)胞器樣品（相當(dāng)于 1 mg 蛋白質(zhì)）      1~35 μl

2. 加入激酶，開(kāi)始反應(yīng)。

3. 加入 10 ml 冰冷的 5X SDS-PAGE 加樣緩沖液終止反應(yīng)。

4. 混勻，于沸水浴煮 3 分鐘。

5. 加樣至 SDS-PAGE 凝膠。