用分離的亞細胞組分分析蛋白質的磷酸化
材料與儀器
樣品
胞內緩沖液 透化緩沖液
離心管
步驟
1. 分離細胞器。
2. 于 4℃ 用胞內緩沖液清洗細胞器樣品 3 次，將相當于 1 mg 蛋白質的樣品轉至帶螺帽的小離心管，放入冰盒。
3. 離心，吸去上清，加 200 μl 預熱至 37℃ 的透化緩沖液，輕輕混勻，放入 37℃ 水浴箱 。
4. 加鏈球菌溶血素 O 儲存液至終濃度 60 單位/ml，加冷 ATP 儲存液至 100 μmol/L。
5. 加 [γ-32P] ATP 至終濃度 50~500 μCi/ml。
6. 加入要試驗的試劑，如激酶/磷酸酶抑制劑、蛋白質激酶或者磷酸酶。
7. 制備免疫沉淀分析樣品或者 PAGE 樣品。
