質粒DNA提取實驗
實驗方法原理
堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。
一、材料與試劑準備
1. 材料：大腸桿菌。
2. 儀器：超凈工作臺，培養箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺式離心機，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測儀。
3. 試劑：
（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl（pH7.4），10 mM EDTA（pH8.0），50 mM葡萄糖，高壓滅菌，4℃保存。
（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 現配現用。
（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高壓滅菌，4℃保存。
（4）3 M NaAc pH5.2，高壓滅菌，4℃保存。
（5）異丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，無水乙醇，70%乙醇，LB培養基，電泳試劑。
二、操作步驟
1. 細菌繁殖：LB培養基，2 ml/20 ml，37℃，200 rpm，搖一搖，過夜。
2. 離心10 min，5 000 rpm， 4℃；棄上淸液。
3. 沉淀（菌體細胞）預冷的TES緩沖液洗滌，離心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入預冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。
4. 重新懸浮，加入150 ul溶菌酶母液，室溫放置5 min。
5. 加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。
6. 加入0.9 ml預冷乙酸鉀，混勻，離心10 min，12 000 rpm，4℃。
7. 加入1.5 ml異丙醇，-20℃冰箱內放置15 min。
8. 離心10 min，12 000 rpm，4℃。
9. 取沉淀，懸于400 ul TE緩沖液中。
10. 加入40 ul，3 M NaAc。
11. 酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀。
12. 離心10 min，12 000 rpm，4℃。
13. 取沉淀，冷凍干燥，再懸浮于50 ul TE緩沖液中。
14. 電泳檢測提取DNA的質量。
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