瓊脂糖凝膠電泳回收PCR產(chǎn)物
一．原理
DNA片斷的分離與回收是基因工程 操作中的一項(xiàng)重要技術(shù)，例如可收集特定酶切片斷用于克隆或制備探針，回收PCR 產(chǎn)物用于再次鑒定等。回收實(shí)驗(yàn)中兩個(gè)最重要的技術(shù)指標(biāo)是純度和回收率：前者未達(dá)標(biāo)時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響以后的酶切、連接、標(biāo)記等酶參與的反應(yīng)；后者不理想時(shí)往往會(huì)大大增加前期的工作量。
本實(shí)驗(yàn)采用的是V-GENE公司的DNA凝膠回收試劑盒，其原理是：在凝膠融化液（BufferDE-A）中凝膠塊被迅速融化并釋放出DNA。加入高離液序列溶液（Buffer DE-B）后DNA片斷被選擇性吸附到silica膜上。經(jīng)Buffer W1、Buffer W2洗滌去除殘留在silica膜上的雜質(zhì)和高濃度鹽離子后，吸附到silica膜上的DNA片斷經(jīng)微量水或Eluent洗脫下來，即可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
二．材料與方法
1 材料
PCR產(chǎn)物（未經(jīng)純化）
2 儀器、用具
電泳儀、電泳槽、凝膠樣品梳、微波爐、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、恒溫孵育器（55-65℃）、
1.5ml 離心管
3 試劑
1×TAE電泳緩沖液；溴化乙錠溶液（EB）
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