影響酶作用的因素
1.掌握溫度對酶活性的影響；
2.掌握酶活性的最適pH及掌握一種檢測最適pH的方法；
3.掌握激活劑和抑制劑對酶活性的影響。
【 器材和 試劑 】
1.器材
試管及試管架、燒杯、恒溫水浴箱、冰塊、白瓷板
2. 試劑
（1）0.5%淀粉液、0.2%淀粉液
（2）0.3%NaCl溶液、0.85%NaCl溶液。
（3）不同pH值緩沖液的配置：①1/15mol/LKH 2 PO 4 液：稱取純KH 2 PO 4 9.078g/>,，加蒸餾水溶解并稀釋至1000ml。②1/15mol/L Na 2 HPO 4 液：稱取純Na 2 HPO 4 ·2H 2 O 11.815g/>，加蒸餾水溶解并稀釋至1000ml。
兩液按下表比例混合均勻，即可得各pH的緩沖液。
（4）碘化鉀-碘溶液：將碘化鉀 20g/>及碘 10g/>溶于100ml水中。使用前稀釋10倍。
（5）1%CuSO 4 溶液。
（6）1%Na 2 SO 4 溶液。
【實驗內(nèi)容】
（一）溫度對酶活性的影響
【 實驗原理 】
由于酶是 生物 催化劑，其本質(zhì)是蛋白質(zhì)。因此，對溫度敏感是酶的一個重要特性，溫度對酶促反應(yīng)速度具有雙重影響。
酶作為 生物 催化劑，和一般催化劑一樣呈現(xiàn)出溫度效應(yīng)，一方面，升高溫度可以增加活化分子數(shù)目，提高酶促反應(yīng)速度，另一方面，當溫度超過一定范圍時，又會加速酶蛋白的變性速度，增加了酶的熱變性。所以在較低的溫度范圍內(nèi)，升高溫度增加活化分子數(shù)目，酶反應(yīng)速度隨溫度升高而增大，加快反應(yīng)速度這一效應(yīng)起主導作用；但是超過一定溫度后，溫度繼續(xù)升高，酶的變性失活起主導作用，反應(yīng)速度反而下降。酶反應(yīng)速度達到最大時的溫度稱為酶的最適溫度。在最適溫度下，酶的反應(yīng)速度最高。酶的最適溫度不是一個常數(shù)，它與作用時間的長短有關(guān)系。
大多數(shù)動物酶的最適溫度為 37～40℃，植物酶的最適溫度為50～60℃。酶對溫度的穩(wěn)定性與其存在形式有關(guān)。有些酶的干燥制劑，雖加熱到 100℃/>，其活性并無明顯改變，但在 100℃/>的溶液中卻很快地完全失去活性。低溫能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
本實驗以唾液淀粉酶為例。在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來判斷。淀粉遇碘呈藍色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈藍色、紫色、暗褐色或紅色。最簡單的糊精遇碘不顯顏色，麥芽糖遇碘也不顯色。
淀粉-------------→糊精-----------→麥芽糖
遇碘：藍色--------→紫色至紅色--------→碘色
【 操作步驟 】
1．制備稀唾液。用蒸餾水漱口，以清除食物殘渣，再含少許蒸餾水，作咀嚼動作以刺激唾液分泌。取小漏斗1個，墊小塊薄薄的脫脂棉，直接將唾液吐入小漏斗，取得濾液，加水至9ml，混勻備用。
2．取小 試管 3支，編號，按下表加入各種試劑。
3．混勻后，將1號、2號、3號 試管 分別置于沸 水浴 、溫 水浴 （37～ 40℃/>）和冰浴中5min,向各管加入稀唾液3滴，繼續(xù)在原水浴中放置5min。
4．各管取出2滴試液在白瓷板上，觀察顏色并記錄。
5．然后再將1、3兩管置 37℃/>水浴中5 min，各管中加碘液，觀察顏色變化并分析。
（二）pH、激活劑、抑制劑對酶活性的影響
【 實驗原理 】
環(huán)境pH直接影響到酶和底物的解離狀態(tài)，從而影響到酶與底物的結(jié)合和反應(yīng)速度。在某一定pH時，酶活性大最大值，這一pH成為酶的最適pH。環(huán)境pH高于或低于最適pH時，酶的活性降低，遠離最適pH時，甚至會導致酶的變性失活。不同的酶最適pH不盡相同。酶的最適pH不是一個特征性的物理常數(shù)，對于一個酶，其最適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。
人體多數(shù)酶的最適pH在7.0左右。例如唾液淀粉酶的最適pH為6.8。
使酶由無活性變?yōu)橛谢钚裕蚴姑富钚栽黾拥奈镔|(zhì)稱為酶的激活劑，激活劑大多為金屬離子，如Mg 2+ 、K + 、Mn 2+ 等，少數(shù)為陰離子，如Cl - 等，也有許多有機化合物激活劑，如膽汁酸鹽等。凡能抑制酶促反應(yīng)的物質(zhì)，統(tǒng)稱抑制劑。很少量的激活劑和抑制劑就會影響酶的活性，而且常具有特異性，如Cl - 對唾液淀粉酶酶的活性有激活作用，Cu 2+ 對其則有抑制作用。但激活劑和抑制劑不是絕對的，濃度的改變可能使激活劑變成抑制劑。
本實驗以唾液淀粉酶為例，觀察pH、激活劑和抑制劑對酶活性的影響，觀察淀粉水解的方法同前。
【 操作步驟 】
取 試管 7支，編號，按下表加入試劑
將各管混勻后，同時置于37～ 40℃/>水浴中保溫。約1min后，由第3管取出1滴置白瓷板上作碘反應(yīng)，觀察顏色，呈棕色,（如為藍色，則仍每間隔1min作一次碘反應(yīng)）。將各管取出，各加碘液2滴，搖勻，觀察并解釋其結(jié)果。
【 思考題 】
1.唾液淀粉酶的最適溫度是多少?
2.低溫對酶有什么影響?
3.在第二個實驗中，為什么以第3管作碘反應(yīng)，觀察顏色？有何意義？
4在第二個實驗中，為什么要作CuSO 4 、Na 2 SO 4 的對照實驗？
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