單糖組成分析
【實(shí)驗(yàn)原理】
多糖在濃硫酸中保溫一定時間可完全水解為單糖，通過紙層析分離，特定 試劑 顯色后與已知糖的標(biāo)準(zhǔn)混合物作對比，可以鑒定多糖水解產(chǎn)物中單糖的組成。
【實(shí)驗(yàn)材料】
1. 實(shí)驗(yàn)器材
水解管；濾紙；玻璃毛細(xì)管；層析缸；噴霧器。
2. 實(shí)驗(yàn) 試劑
⑴ 標(biāo)準(zhǔn)糖溶液: 稱取一定量的半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖，用 蒸餾 水溶解，得標(biāo)準(zhǔn)糖混合溶液(每種糖的點(diǎn)樣量為20微克~30微克)。
⑵ 展層劑： 正丁醇：乙酸：水=4：l：5 (上層)。
⑶ 顯色劑：苯胺-鄰苯二甲酸-正丁醇飽和水溶液(鄰苯二甲酸1.6g溶于水飽和的正丁醇100 ml，加苯胺0.93g（相當(dāng)于0.9 ml）。
⑷ BaCO3；1mol/L硫酸。
【實(shí)驗(yàn)操作】
l．完全酸水解：
稱取20 mg多糖樣品，加入1mol/L H 2 SO 4 2ml；封管，l00℃水解8小時，然后加入BaCO 3 中和，定量 濾紙 過濾，濾液留作分析。
2．紙層析：
將層析 濾紙 剪成7cm×40cm的紙條，距層析濾紙一端2cm處畫一橫線作為點(diǎn)樣線,在點(diǎn)樣線上畫兩個點(diǎn)分別作為標(biāo)準(zhǔn)糖溶液和多糖水解液的點(diǎn)樣位置。用玻璃毛細(xì)管點(diǎn)樣，斑點(diǎn)盡可能小，而且每點(diǎn)一滴，待點(diǎn)樣點(diǎn)干燥后，在同一位置再點(diǎn)第二滴。然后將濾紙條懸掛于層析缸中進(jìn)行層析，展層時間約為36小時。
3．顯色：
將濾紙取出，自然干燥，噴上苯胺-鄰苯二甲酸-正丁醇飽和水溶液，100℃條件下15分鐘即可顯色。標(biāo)準(zhǔn)單糖混合物色斑在濾紙上由下而上的順序是：半乳糖-葡萄糖-甘露糖-阿拉伯糖。與標(biāo)準(zhǔn)單糖混合物色斑比較，即可判斷多糖樣品的單糖組成
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