糖鏈的序列測定—Smith降解法
Smith降解是將高碘酸氧化產物用硼氫化合物(如硼氫化鉀或硼氫化鈉)還原成穩定的多羥基化合物。
然后進行適度的酸水解，用紙層析鑒定水解產物，由水解產物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序。
以葡聚糖為例，其反應式如下圖：
以1→2位鍵合的糖基經高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放；
Smith降解后產生甘油。
以1→4位鍵合的糖基經高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放；Smith降解后產生赤蘚醇。
以1→3位鍵和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍為原來糖。
以1→6位鍵和的糖基或非還原末端基（1→）經高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同時釋放一分子甲酸
；Smith降解后產生甘油。
本實驗通過紙層析檢測終產物中的甘油、赤蘚醇和糖。
【實驗材料】
0.1mol/L醋酸。
2mol/L硫酸。
硼氫化鉀。
紙層析 試劑 及器材：除顯色劑外，同實驗二。
硝酸銀顯色劑：
A: 16%硝酸銀水溶液: 丙酮為1：9（V/V）。
B: 1%NaOH乙醇溶液(W/V)。
C: 6mol/L氫氧化銨。
【實驗操作】
1. 還原和水解
高碘酸氧化后經乙二醇處理的溶液對流水透析48小時，蒸餾水透析24小時，于40℃以下減壓濃縮至10ml左右，加入70mg硼氫化鉀于室溫、暗處攪拌18小時~24小時以還原多糖醛。用0.1 mol／L醋酸中和至pH6~7，對流水透析48小時，蒸餾水透析24小時，減壓蒸干，加1 mol／L硫酸2ml，封管，100℃水解8小時，用碳酸鋇粉末中和，定量濾紙過濾，濾液減壓濃縮后，通過紙層析方法檢測。
2. 紙層析
操作詳見實驗2（單糖組成分析）。展層后，將濾紙取出，自然干燥，噴上 試劑 A ，自然干燥，將 濾紙 浸入試劑B中，待斑點顯出后，再浸入試劑C中以洗去 濾紙 上的氧化銀，然后用水沖洗1小時左右，風干。以正丁醇：乙酸：水=4：l：5為展層劑時，甘油的R f 為：0.48，赤蘚醇的R f 為：0.35。
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