玻片PCR
在聚丙烯管中可以對(duì)多種含膜板材料進(jìn)行PCR，而在顯微玻片上用組織細(xì)胞涂片或切片直接進(jìn)行DNA擴(kuò)增的方法就稱(chēng)為玻片PCR（Slide-PCR）。
先將細(xì)胞涂片或呈單層細(xì)胞，然后用甲醇/醋酸（3：1，V/V）、Carnoy溶液、無(wú)水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5～15min。用蒸餾水沖洗，干燥，直接使用或保存于-20℃?zhèn)溆?。在玻片上?0mm×28mm為免疫組化反應(yīng)區(qū)。加入30μl PCR反應(yīng)混合液，其中含10mmol/L Tris pH8.3,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,200μmol/l dNTPs,100nmol/L引物，0.01%（V/V）明膠，0.2% BSA, 2.5u/100μl Taq酶。然后蓋上22mm×40mm的蓋玻片，邊緣用石蠟油封好。把玻片放入PCR熱循環(huán)儀金屬塊上，使金屬塊與樣品呈最大程度接觸，同在聚丙烯管中一樣，進(jìn)行30～40個(gè)循環(huán)。對(duì)于較短的擴(kuò)增片段在后期循環(huán)中變性溫度可降低。反應(yīng)后，將致冷玻片放在氯仿中除去大部分石蠟油，但不取出蓋玻片，用一個(gè)尖鑷子輕輕拈起蓋玻片一角，在相對(duì)的一角中PCR反應(yīng)混合液呈半月形液面，用移液器回收。一般可回收25μl混合液，將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳或用套式PCR引物按標(biāo)準(zhǔn)PCR進(jìn)行重新擴(kuò)增。片上擴(kuò)增物可做原位雜交顯示。
在Slide-PCR中，需0.1%～1%的BSA。加入BSA可以保證擴(kuò)增結(jié)果，但效率不一定很高。明膠（至少0.0001%）,對(duì)擴(kuò)增1kb左右的靶DNA十分重要。但對(duì)小片段擴(kuò)增結(jié)果影響不大。不同的樣品提取方法或固定法對(duì)Slide-PCR都可行。
Silde-PCR的機(jī)理可能是在起始變性過(guò)程中一部分DNA從細(xì)胞中洗提出來(lái)，然后在細(xì)胞和玻片的水相中進(jìn)行PCR。用地高辛標(biāo)記的人全基因組DNA探針雜交表明在起始循環(huán)中DNA極微量，而30個(gè)循環(huán)后很豐富。常規(guī)細(xì)胞染色表明只有少量的形態(tài)改變。
Silde-PCR對(duì)于玻片上的細(xì)胞樣品提供了一種較好的方法，而不必再把這些樣品從玻片上括下來(lái)，使操作簡(jiǎn)便，污染減少。本方法對(duì)于原樣品量極微且需病史追蹤保存的（如子宮頸涂片或涂片）具有實(shí)用價(jià)值。
北京天優(yōu)福康生物科技有限公司
官網(wǎng)：http://m.jyzjsd.com/
服務(wù)熱線：400-860-6160
聯(lián)系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
