普魯卡因胺對血小板功能和超微結構影響的研究

關鍵詞： 普魯卡因胺 血小板 血小板聚集誘導劑 電鏡技術

　　摘要：普魯卡因胺對ADP、花生四烯酸、凝血酶、腎上腺素、膠原、CaCl2、A23187、PAF等多種血小板聚集誘導劑誘導的血小板聚集有顯著的抑制作用。普魯卡因胺使可樂定的濃度-效應曲線平行右移，抑制A23187引起的胞漿游離Ca2+增加，抑制血栓素B2和丙二醛生成，促進6-酮-前列腺素F1α生成，提高6-酮-前列腺素F1α與血栓素B2的比值。降低血小板粘附和小鼠肺血栓栓塞。對血小板及其致密顆粒、α顆粒等超微結構有明顯的保護作用。

　　普魯卡因胺是一種抗心律失常的藥物，心律失常和心肌梗塞有著密切的關系，普魯卡因胺抗心律失常作用的電生理機理為抑制Na+、K+、Ca2+通道。血小板聚集、黏附和釋放反應又是心肌梗塞的重要病理生理基礎。基于上述基本思路，多年來我們對普魯卡因胺對血小板功能和超微結構等的影響進行了基礎理論研究，發現其確有顯著的抑制血小板聚集、粘附、釋放反應和對血小板的超微結構具有明顯的保護作用。現歸納如下：

　　1　抑制血小板聚集、粘附和降低肺血栓作用

　　體內實驗：普魯卡因胺5 mg/kg給免iv，明顯地抑制ADP、花生四烯酸和凝血酶誘導的兔血小板聚集，給藥后2、5、30和60 min對ADP的抑制率分別為42%、32%、30%和17%；給藥后5、15、30和60 min對花生四烯酸的抑制率分別為70%、74%、50%和44%，對凝血酶的抑制率依次為32%、27%、24%和28%。6 mg/kg給豚鼠iv，給藥后5 min明顯抑制ADP誘導的豚鼠血小板聚集，抑制率為32%。體外實驗：普魯卡因胺2～2048 μg/ml明顯抑制ADP誘導的兔和豚鼠的血小板聚集，對兔血小板聚集的抑制率為18%～97%，對豚鼠的抑制率為11%～92%［1，2］。普魯卡因胺8.5～8704 μmol/L對花生四烯酸誘導的兔血小板聚集的抑制率為20%～100%，對凝血酶誘導的血小板聚集的抑制率為33%～87%，對CaCl2誘導聚集的抑制率為－2%～77%［2］。普魯卡因胺8.5～152.7 μmol/L顯著地抑制可樂定9～8837 nmol/L誘導的兔血小板聚集作用，并使可樂定誘導的濃度-效應曲線平行右移，可樂定的EC50隨著普魯卡因胺濃度增加而增加，PD2隨著普魯卡因胺濃度的增加而降低；普魯卡因胺的PA2=5.0±0.6，A2=10.4 μmol/L［2，3］。普魯卡因胺8.5～544.0 μmol/L也抑制膠原和血小板激活因子(PAF)誘導的兔血小板聚集，對膠原的抑制率為14.4%～60.0%，對PAF的抑制率為38.3%～71.7%［4］。55.2 μmol/L和220.8 μmol/L的普魯卡因胺顯著地抑制膠原和腎上腺素混合液誘導的血小板聚集［5］。普魯卡因胺8.5、34.0、136.0 μmol/L顯著地抑制A23187、ADP、花生四烯酸和腎上腺素誘導的人血小板聚集作用，對A23187的最大抑制率為20.6%～63.7%，對ADP的抑制率為11.6%～13.7%，對花生四烯酸的抑制率為63.0%～84.6%，對腎上腺素的抑制率為7.1%～29.6%［6，7］。

　　大鼠體內外實驗證明普魯卡因胺具有顯著地抑制血小板粘附作用。體外實驗：普魯卡因胺 8.5、34.0、136.0 μmol/L對血小板粘附的抑制率分別為8%、28%和56%。體內實驗：普魯卡因胺10 mg/kg經下腔靜脈給大鼠注射，注射后5 min取血，檢測血小板粘附率，結果表明對血小板粘附的抑制率為24%［8］。

　　給30～35 g小鼠尾靜脈注射100 μl膠原(10 μg)和腎上腺素(5 μg)混合液制造肺血栓栓塞模型，普魯卡因胺5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg腹腔注射可使肺栓塞小鼠的幸存率提高30%～80%，同時，血小板計數明顯高于肺血栓組［5，9］。

　　2　對血小板及其超微結構的保護作用

　　制備血小板超薄切片，用電鏡觀察血小板超微結構變化。普魯卡因胺8.5～136.0 μmol/L顯著地抑制血小板偽足、α顆粒、致密顆粒、糖原、開放管道及致密管道系統結構的改變，抑制聚集和釋放反應，并存在著劑量依賴關系［10，11］。以體視學形態計量法定量觀察普魯卡因胺對血小板及其超微結構的保護作用。在血小板形態參數中與NS組比較，8.5、34.0和136.0 μmol/L普魯卡因胺的SS值顯著升高，升高率為20.6%、34.2%和42.7%；、和值降低，的降低率為41.4%、43.7%和55.7%；的降低率為7.8%、13.3%和18.8%；值的降低率為11.9%、42.7%和62.4%。在OCS參數中，與NS組比較，SS值明顯降低，降低率為5.9%、36.5%和42.4%；Sv值明顯升高，升高率為2.5%、61.2%和73.8%；Vv值變化不顯著；Vt值顯著升高，升高率為16.0%、52.4%和64.8%［12］。8.5、34.0和136.0 μmol/L，普魯卡因胺對致密顆粒和α顆粒有顯著的保護作用。與NS組比較，在致密顆粒的參數中，SS、Sv、St、Vv和Vt明顯升高，SS升高率為153.6%、225.0%和256.2%；Sv升高率為81.6%、117.7%和188.9%；St升高率為96.3%、104.6%和145.3%；Vv的升高率為144.0%、205.6%和499.7%；Vt的升高率為221.3%、1000.9%和1593.4%。在α顆粒參數中，Nv升高率為68.2%、174.8%和335.9%；N升高率為14.8%、439.3%和696.0%；的升高率為45.4%、76.7%和87.5%；SS的升高率為-50.7%、-52.9%和-57.1%；Sv升高率為160.3%、360.5%和558.0%；St升高率為181.5%、313.5%和395.7%；的升高率為87.8%、106.0%和127.7%；、的升高率為81.4%、126.7%和202.3%；Vv的升高率為410.5%、678.9%和773.6%；Vt的升高率為195.8%、282.6%和297.8%［13］。

　　以上各種參數值隨著普魯卡因胺濃度增加與NS對照組差異性增加，但與空白對照組比較差異性減小，在最高濃度136.0 μmol/L中，除個別參數外，與空白對照組的各種參數值無顯著差異性。以上結果說明普魯卡因胺對血小板及其超微結構具有明顯的保護作用，抑制血小板聚集、粘附和釋放反應。

　　3　降低血小板細胞內游離Ca2+的濃度

　　普魯卡因胺8.5、34.0、136.0 μmol/L顯著地抑制人血小板內游離Ca2+增加。用Fura-2負荷的血小板細胞內的正常鈣［Ca2+］i為95 nmol/L，當用0.5 μmol/L A23187刺激時，［Ca2+］i增加到1200 nmol/L，而給三種濃度普魯卡因胺后，可降低到650～450 nmol/L。而且［Ca2+］i改變與一分鐘聚集率和最大聚集率間呈顯著線性相關(P＜0.05)［6］。用570型粘附式細胞儀動態觀察普魯卡因胺對凝血酶激活的單個血小板細胞內游離Ca2+的影響。靜息狀態時對照組和給藥組熒光值均較低，當加入0.1 u/ml凝血酶時，熒光強度迅速上升，兩組達峰值時間均為20 s，但給藥組最大升高幅度比對照組低21%(P＜0.05)。隨后熒光強度迅速下降，兩組下降率均為-1 u/s，對照組和給藥組下降幅度分別為57%和76%(P＜0.05)。結果說明，普魯卡因胺降低凝血酶誘導的血小板內游離Ca2+升高，而對Ca2+的再攝取沒有影響［14］。

　　4　促進6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)生成及抑制血栓素B2(TXB2)和丙二醛(MDA)產生的作用

　　以膠原和腎上腺素混合液制造的小鼠血栓模型中，以5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg普魯卡因胺給小鼠腹腔注射，用放免法測定6-keto-PGF1α和TXB2的血漿含量，結果表明，明顯促進6-keto-PGF1α的生成，生成量提高率為70.8%～223.9%；同時顯著地抑制TXB2產生，抑制率為20.5%～44.7%。6-keto-PGF1α與TXB2的比值明顯提高，對照組為1.2，藥物組分別為2.6、4.0和7.1［9］。體外實驗證明，普魯卡因胺顯著地抑制花生四烯酸，ADP和凝血酶誘導的兔血小板聚集時產生TXB2。普魯卡因胺8.5、34.0和136.0 μmol/L和554.0 μmol/L對ADP誘導的血小板產生的TXB2的抑制率為21.4%、36.6%、62.0%和70.1%；對疑血酶誘導血小板產生的TXB2的抑制率為53%、65%、90%和95%；普魯卡因胺的濃度與抑制TXB2產生的效力之間存在著正相關關系，血小板聚集抑制率和TXB2產生的抑制率之間也存在著正相關關系［2，15，16］。在小鼠肺血栓栓塞時，20 mg/kg普魯卡因胺腹腔注射給藥后顯著地抑制MDA的產生；體外實驗證明，55.2和220.8 μmol/L的普魯卡因胺顯著地抑制膠原和腎上腺素誘導血小板聚集時引起的MDA增加［5］。

　　總之，體內外實驗證明，普魯卡因胺明顯地抑制血小板聚集、粘附和釋放反應；對血小板及其超微結構有明顯的保護作用；降低血小板內游離Ca2+的濃度；促進6-keto-PGF1α生成，抑制血小板制TXB2和MDA的產生；且具有抗小鼠肺血栓作用。

　　其作用機理可能是多方面的；但是比較肯定的是降低細胞內游離Ca2+，促進6-kcto-pGFlα生面。抑制TXB2和MDA產生。這些作用可能是普魯卡因胺作用于血小板模受體，影響花生四烯酸代謝的結果。

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