層析技術（色譜法或色層法）

層析法又稱色譜法或色層法，開始由分離植物色素而得名，后來不僅用于分離有色物質，而且在多數情況是用于分離無色物質。層析法是近代 生物 化學最常用的分析方法之一，此種方法可以分離和鑒定性質極為相似，而且用一般化學方法難以分離的多種化合物，如氨基酸、蛋白質、糖、脂類、核苷酸、核酸等。
一、層析的基本原理
　　層析法是利用混合物各組分物理化學性質（溶解度、吸附能力、電荷、分子大小與形狀及分子親和力等）的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為固定相，另一相即流過此固定相的液體或氣體稱流動相，從而使各組分以不同的速度隨流動相向前移動而達到分離的目的。
　　在層析過程中，溶質在固定相和流動相中差速遷移，它既可進入固定相，又可進入流動相，這個過程叫分配過程，不論層析機理屬于哪一種，分配過程都存在。分配過程進行的速度，可用分配系數  K  表示：
K  ＝ 
　　比值  K  在低濃度時是個常數，只受溫度影響。不同的層析機理，  K  的含義不同。在吸附層析中， K 為吸附平衡常數；在分配層析中，  K  為分配系數；在離子交換層析中，  K  為交換常數；在親和層析中，  K  為親和系數。
　　混合物中各組分的分配系數往往是不同的，即保留在固定相中的特性是不同的。常用保留時間，即被分析樣品從進樣開始到流出液中出現濃度極大點的時間；或保留體積，即被分析樣品從進樣開始到流出液中出現濃度極大點時，所通過流動相的體積來衡量。
　　分配系數  K  值大，說明該物質在柱中被吸附得牢，移動速度慢，在固定相中停留的時間長，將最后出現在洗脫液中亦既保留體積大，保留時間長。反之，如  K  值小，即這種物質在柱中被吸附得弱，移動速度快，將首先出現在洗脫液中。亦既保留體積小，保留時間短?？梢娀旌衔镏懈鹘M分之間分配系數  K  值相差愈大，各物質愈容易彼此分開。如果  K  ＝ 0, 就意味這溶質不能進入固定相，而始終保留在流動相里，并隨著流動相迅速的流出。顯然，這種固定相和流動相體系是不能實現分離的。因此，應當根據被分離物質的化學結構和性質（極性）適當的選擇固定相和流動相，并且使各組分的分配系數盡可能大一些，就可以使混合物中各組分分離完全。
二、層析的分類
（一）按層析兩相所處的狀態分類
　　流動相有液體和氣體兩種狀態。液體作為流動相，稱為液相層析；氣體作為流動相，稱為氣相層析。固定相有液體和固體兩種狀態，即以固體吸附劑作為固定相和以附載在固體上的液體作為固定相。所以，層析法按兩相所處的狀態可以分為：
　　1 ．液相層析
（ 1 ）液 — 固層析 液體作為流動相，固體吸附劑作為固定相。
（ 2 ）液 — 液層析 液體作為流動相，附載在固體上的液體作為固定相。
　　 2 ．氣相層析
（ 1 ）氣 — 固層析 氣體作為流動相，固體吸附劑作為固定相。
（ 2 ）氣 — 液層析 氣體作為流動相，附載在固體上的液體作為固定相。
（二）按層析過程的機制分類
　　1 ．分配層析
　　利用不同組分在流動相和固定相之間的分配系數（或溶解度）不同，而使之分離的技術。
　　2 ．吸附層析
　　利用不同組分被吸附劑表面吸附性能的差異，而使之分離的技術。
　　3 ．離子交換層析
　　利用不同組分對離子交換劑親和力的不同，而進行分離的技術。
　　4 ．凝膠層析
　　利用某些凝膠對不同組分因其分子大小不同而阻滯作用不同的差異，而進行分離的技術。
　　5 ．親和層析
　　利用某些 生物 高分子能與相應的配體專一可逆結合的機理，而進行分離純化高分子的技術。

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