原代培養中成纖維細胞的抑制

成纖維型細胞：在培養中的細胞凡形態與成纖維細胞類似時，皆可稱之為成纖維細胞。本型細胞由形態與體內成纖維細胞的形態相似而得名，細胞在支持物表面呈梭形或不規則三角形生長，細胞中央有卵園形核，胞質向外伸出2-3 厘米個長短不同的突起，除真正的成纖維細胞外，凡由中胚層間質起源的組織細胞常呈本類形態生長。

培養細胞的純化

培養細胞的純化：

1、自然純化

即利用某一種類細胞的增殖優勢，而排擠其他細胞生長，靠自然的增值潛力最后留下生長優勢細胞，去除其他細胞。有些惡性腫瘤細胞可以通過此方法，自然純化建立細胞系。

2、人工純化

（1）酶消化法

在消化培養細胞時，常是成纖維細胞先脫壁，而上皮細胞要消化相當長的時間才脫壁，特別是在原代培養和培養早期這種差別尤為明顯，因而可以利用這種差異采用多次差別消化方法將上皮細胞和成纖維細胞分開。

（2）機械劃除法

原代培養成功后，上皮細胞和成纖維細胞所數都同時出現，混雜生長。這種混雜生長常常分區成片，每種細胞都以小片或區域性分布的方式生長在瓶壁上。因此可以采用機械的方法去除不需要的細胞。

（3）反復貼壁法

成纖維細胞與上皮細胞相比，其貼壁過程快，大部分細胞常能在短時間內大約10－30min完成附著過程，而上皮細胞大部分在短時間內不能附著或附著不穩定，稍加振蕩即浮起，這樣可以利用此差別來純化細胞。

（4）克隆法

采用細胞克隆法將細胞分成單個細胞，使之分別生長成克隆，選擇出所需要的克隆。

（5）培養及限定方法

某些細胞在生長過程中必須存在或必須去除某種物質，否則無法生長，可以利用這種技術來純化細胞。

（6）流式分選

brdu

【sxtyzyq2】除了Brdu能用于抑制成纖維細胞的生長，便宜易買到的

【snany】阿糖孢苷效果不是特別理想

【cl1202】我在SD大鼠胃粘膜壁細胞原代培養的文獻中看到的：成纖維細胞大量生長是壁細胞分離培養失敗的常見原因。培養基中加入血清會刺激成纖維細胞而抑制壁細胞生長，對壁細胞可能還有一定的毒性作用。為了減少成纖維細胞的生長，先加入含有胎牛血清（100ml/L）的培養液，時差貼壁30-45分鐘，除去成纖維細胞，然后再換用無血清的培養液進行培養。不知道你有沒有用？試試吧。

【sxtyzyq2】買sigma公司的brdu然后把它配成終濃度為1 mmol/l然后1ml培養液中加入5微升就可抑制成纖維細胞

【gfeng8078】我是養心肌原代，也需要抑制成纖維細胞，請問各位大俠，5-brdu用多大的濃度？

【cheerfulness】養心肌原代 最初24h培養液中加入終濃度為0.1mmol/L的brdu

【gfeng8078】你是怎么樣達到0.1mmol/L的濃度呀，由于有培養液的存在，加了Brdu進去，自然就稀釋了？我想把Brdu溶解于DMEM中然后一起抽濾，可是有報道說這對Brdu的藥效有影響

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