細胞培養知識和技術

1、細胞（組織）培養年鑒

1878 Claude Bernard:證明一個器官的生理系統在個體死亡以后仍然可以人工維持。

1885 Wilhelm Roux:在一個生理溶液中維持一快雞胚的活性并觀察其發育，從而證實該發育與雞胚的其他部分無關。

1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作為培養基，在體外培養青蛙神經嵴，維持其活性達數星期，并觀察到了神經纖維的生長，從解決了神經纖維的來源問題。Ross Harrison被人稱為細胞培養之父。

1910 Burrows:率先在血漿凝塊中長期培養雞胚細胞.

1911 Lewis & Lewis:由海水、血清、胚胎提取物和鹽和蛋白胨為原料配制成了第一個人工的細胞培養液，并觀察到了單層細胞的有限生長。

1916 Rous & Jones:開創使用胰酶來收獲貼壁生長的細胞。

1923-1931 Carrel & Baker:研制T型培養瓶大規模培養細胞。

1927 Carrel & Rivera:制造了第一個病毒疫苗：牛痘疫苗。

1933 Gey: 發明了轉管培養細胞的技術。

1948 Fisher: 研制成了第一個化學成分清楚的細胞培養液CMRL1006，該培養液至今還在使用。

1952 Gey 和同事：分離培養了Hela細胞。

1952 Dulbecco:發明了噬斑法，用長滿的單層細胞檢測病毒。

1954 Abercrombie: 觀察到了體外培養細胞接觸抑制的現象。

1961 Hatflick & Moorhead：顯示人成纖維細胞在一定的代數之后會死亡。

1965 Ham:配制了第一個無血清培養液。

1975 Kohler & Miltein:成功的得到了第一個用于單抗生產的雜交瘤細胞株。

2、怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件？

ATCC (American Type Culture Collection) 收集了絕大多數常用細胞的詳細資料。

打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。

數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養和凍存條件，顯微形態以及相關文獻等資料。

3、為什么大多數細胞培養需要用二氧化碳培養箱?

一般細胞培養液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統是一種生理pH緩沖系統（它是人體血液中最重要的pH緩沖系統），所以大多數培養液用它來保持穩定的pH。用粉末配制培養液時，常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。

對大多數以碳酸鹽作為pH緩沖系統的培養液而言，以為了維持穩定的pH，培養箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。

是不是采用其他pH緩沖系統就不需要二氧化碳培養箱了呢？人們發現由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細胞不在二氧化碳培養箱中培養，培養液中的HCO3-會被耗盡，這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養，還是需要二氧化碳培養箱。

細胞培養液中常附加其他的pH緩沖系統，比如HEPES緩沖系統，來增加pH緩沖能力。HEPES在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力，當透氣的培養器皿被拿到二氧化碳培養箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養液中碳酸鹽緩沖系統就會失去效果，這時候HEPES緩沖系統就能繼續保持pH的穩定。

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