卵巢癌細胞的傳代
我所用的卵巢癌的細胞包括SKOV3、A2780、3AO、OVCAR3、HRA,幾種細胞的特性不完全一樣,但是我的傳代的步驟是基本一致的:
細胞生長至80%匯合時傳代,先倒掉培養液,加預先加好雙抗的生理鹽水或PBS 5-10ml(100ml培養瓶)后輕輕搖晃數次后倒掉,加0.25-0.35%的胰酶2ml,并使其分布均勻(這一點很重要,一定要注意工作臺是否平整,否則容易造成胰酶分布不均勻而細胞消化不同步),待細胞間隙變大時終止消化,加含10%血清的培養液(我用的是1640)4ml輕柔吹打,再按照需傳代的比例(1:2或1:3)補足培養液后分裝至2-3個培養瓶中。
若細胞碎片較多,可在消化后不倒掉胰酶直接加含血清的培養液吹打后500rpm離心5min,再用培養液重懸分瓶。消化所需的具體時間依細胞的種類和狀態而定,也和細胞的匯合程度有關,一般是80%匯合時最容易消化,若細胞長得太滿,消化時間要適當延長,必要時可以將培養瓶移至培養箱內消化。另外,一次性培養瓶要比玻璃培養瓶所需的消化時間稍長。
胰腺癌細胞我所養的是CAP,感覺不太好伺候,尤其是傳代時很困難。我一般是在倒掉培養液后,加生理鹽水或PBS沖洗,而后加一次胰酶作用3-5分鐘,倒掉胰酶,再加2-3ml新的胰酶繼續消化,這樣加兩次的效果好一些,但是吹打的時候還是很困難,總感覺細胞的貼壁能力太強了,明明看見細胞已經變圓了,可就是吹不下來。現在想想可能在胰酶中加EDTA會好一些。
相比而言,還是HELA好養,細胞的狀態一直不錯,而且消化時也很容易。
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