色譜柱的使用及維護(hù)

色譜柱的維護(hù)

1、使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）。

2、流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理。

3、避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化。

4、大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2～7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍。

5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存乙腈中。

6、壓力升高是需要更換預(yù)柱或沖洗色譜柱的信號(hào)。

系統(tǒng)注意事項(xiàng)

1、開(kāi)、關(guān)系統(tǒng)，流速應(yīng)有緩沖（1ml/min→0.8ml/min→0.4ml/min→0ml/min），以免壓力突變致使柱頭填料塌陷。

2、流動(dòng)相是緩沖液系統(tǒng)，不要直接切換到強(qiáng)溶劑，突然轉(zhuǎn)換到高濃度有機(jī)溶劑可能會(huì)使HPLC流動(dòng)體系中的緩沖液沉淀，這樣會(huì)導(dǎo)致更大的問(wèn)題如柱頭堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞損傷或進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)軸失靈。應(yīng)該先用無(wú)緩沖流動(dòng)相（即把緩沖液換成水），沖洗5～10個(gè)柱體積以后才更換強(qiáng)溶劑。

3、做完測(cè)試后切忌直接用100%有機(jī)溶劑沖洗柱子，須用90%水-10%有機(jī)溶劑（如流動(dòng)相是緩沖液，應(yīng)用純水或含5%有機(jī)溶劑-水溶液）沖洗至少30min后，用有機(jī)溶劑沖洗30min左右，最后將色譜柱保存在有機(jī)溶劑中。

4、更換色譜柱前，須對(duì)使用的色譜柱進(jìn)行沖洗、平衡后，保存在有機(jī)溶劑中（最好是乙腈中）。

5、取下色譜柱時(shí)，應(yīng)立即將兩端封口。

6、除特殊情況外，一般都應(yīng)使用預(yù)保護(hù)柱。

平衡色譜柱的原因

反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的，由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉，如不進(jìn)行平衡，樣品中含有的一些鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些生物物質(zhì)很容易與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)，使這些物質(zhì)吸附在色譜柱上，使色譜柱污染。

如何平衡色譜柱？

因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，我們應(yīng)先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果我們所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過(guò)渡”。平衡過(guò)程中，將流速緩慢地提高用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）。

色譜柱污染后可能出現(xiàn)的情況？

滯留在色譜柱中被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使他們開(kāi)始形成新的固定相，有時(shí)候這些分析物能與這些雜質(zhì)作用形成一定的分離機(jī)理，這些非目標(biāo)產(chǎn)物的干擾能被檢測(cè)器檢測(cè)到而且能形成色譜峰，氣泡，基線擾動(dòng)及基線漂移等現(xiàn)象，在色譜圖上出現(xiàn)“怪峰”，表現(xiàn)為負(fù)峰、寬峰、饅頭峰、雙頭峰及前吐舌后拖尾峰和 保留時(shí)間會(huì)波動(dòng)。這些行為通常只有通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)才能發(fā)現(xiàn)。

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