液相色譜常見問題及處理辦法

一、問：用HPLC進行分析時，保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在？如何解決？

關于漂移問題：

1． 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定。

2． 流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等。

3． 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡。

關于快速變化問題：

1． 流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定。

2． 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

3． 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合。

二、問：色質聯用中毛細柱的選擇應注意什么問題？

1． 柱效要高

2． 熱穩定性好

3． 化學惰性強

具體選擇應注意：

1． 柱極性。根據分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析。

2． 柱子內徑。內徑大小決定柱容量。

3． 液膜厚度。分析樣品溫度不一樣，對膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄。

4． 柱長度。柱越長，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時間長，因此要根據樣品考慮柱子長度。

5． 外涂層（柱體）的選擇。

6． 另外還有儀器型號、分析對象等因素。

三、問：液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么？

1． 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

2． 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。

四、問：從那些方面可以簡單判別毛細管柱子的熱穩定性好壞？

1． 分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應有明顯的下降，否則，說明柱子的熱穩定性不好。

2． 理論塔板數n，熱穩定性好的柱子經受高溫后，理論塔板數應基本保持恒定。

3． 柱子的極性。熱穩定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現為保留指數I值沒有大的變化。

4． 噪聲。熱穩定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加。

5． 柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質量好的毛細管柱子高溫后，去活層不應該變化，表現在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

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