細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)：RTCA技術(shù)法

一、核心技術(shù)介紹

實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)（RTCA，Real Time Cellular Analysis）是通過(guò)特殊工藝，將微電子細(xì)胞傳感器芯片整合到細(xì)胞檢測(cè)板的底部，用以構(gòu)建實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)、定量跟蹤細(xì)胞形態(tài)和增殖分化等改變的細(xì)胞阻抗檢測(cè)傳感系統(tǒng)。

當(dāng)貼壁生長(zhǎng)在微電極表面的細(xì)胞引起貼壁電極界面阻抗的改變時(shí)，這種改變與細(xì)胞的實(shí)時(shí)功能狀態(tài)改變呈相關(guān)性，通過(guò)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的電極阻抗檢測(cè)可以獲得細(xì)胞生理功能相關(guān)的生物信息，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、伸展、形態(tài)變化、死亡和貼壁等。

二、主要儀器及設(shè)備

xCELLigence或iCELLigence 細(xì)胞功能分析儀及對(duì)應(yīng)的E-Plate檢測(cè)板、超凈工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱、低速離心機(jī)、移液器、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、光學(xué)顯微鏡。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、向E-Plate檢測(cè)板中加入培養(yǎng)基并測(cè)定背景阻抗值。

2、收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，向E-Plate檢測(cè)板中加入一定 體積的細(xì)胞，室溫超凈臺(tái)內(nèi)放置30min。

3、將加入細(xì)胞的E-Plate檢測(cè)板放入檢測(cè)臺(tái)上（檢測(cè)臺(tái)預(yù)先放入培養(yǎng)箱中）， 進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的細(xì)胞增殖檢測(cè)。

4、過(guò)夜檢測(cè)后，向各培養(yǎng)孔中加入配制好的梯度藥物并繼續(xù)進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)， 即可獲得化合物介導(dǎo)的細(xì)胞效應(yīng)曲線及不同時(shí)間段IC50值。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)例

典型的利用RTCA技術(shù)獲得的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果：

利用RTCA技術(shù)獲得的典型的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果：

五、與傳統(tǒng)方法（MTT）對(duì)比優(yōu)勢(shì)

1、實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，步驟少，人為誤差小。

2、采用無(wú)標(biāo)記方法，不存在標(biāo)記效率問(wèn)題，并且對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷，細(xì)胞在最接近生理狀態(tài)下進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確度高。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀，重復(fù)性好，不需設(shè)置重復(fù)孔（實(shí)驗(yàn)操作需規(guī)范，如有特殊要求也可設(shè)置重復(fù)孔）。

4、因預(yù)先對(duì)基礎(chǔ)阻抗值測(cè)定，所以無(wú)需設(shè)置空白對(duì)照孔。

5、完整細(xì)胞效應(yīng)圖譜，提供大量、重要的動(dòng)態(tài)反應(yīng)信息。

六、延伸實(shí)驗(yàn)

可通過(guò)對(duì)細(xì)胞增殖及毒性的實(shí)時(shí)檢測(cè)，確定細(xì)胞變化的關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)，檢測(cè)后的細(xì)胞樣品可用于細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、Western blot、Elisa、細(xì)胞凋亡及免疫熒光等細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

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