抑郁癥的體外模型

抑郁等精神疾患的發(fā)生可能與過量GC對海馬的選擇性損傷有關(guān),但機(jī)理不明,Heuser和Cosi等報道可能是由于高濃度GC導(dǎo)致神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)水平降低造成的,而抗抑郁劑不僅使GC受體上調(diào),HPA軸反饋恢復(fù)正常,而且使神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)升高,達(dá)到治療目的.PC12細(xì)胞株為大鼠嗜鉻細(xì)胞克隆化細(xì)胞株,分化的PC12細(xì)胞有典型的神經(jīng)細(xì)胞特征,其胞膜上GC受體表達(dá)豐富[6].本文根據(jù)文獻(xiàn)方法以高濃度皮質(zhì)酮(corticosterone)模擬抑郁及焦慮癥神經(jīng)細(xì)胞損傷狀態(tài)
實(shí)驗(yàn)操作(MTT法測定細(xì)胞存活力)
嗜鉻細(xì)胞瘤株P(guān)C12細(xì)胞.用含5%胎牛血清及5%馬血清的DMEM培養(yǎng)基(含青霉素鈉200kU.L-1,鏈霉素100mg.L-1pH7.4)調(diào)細(xì)胞密度為2x108L-1接種于預(yù)先用多聚賴氨酸(0.1g.L-1)處理過的96孔培養(yǎng)板,每孔10LL,放入CO2孵箱,培養(yǎng)3~4d,待細(xì)胞長滿孔底后即可用于實(shí)驗(yàn).參照文獻(xiàn)方法,稍加修改,吸去細(xì)胞液換上含有相應(yīng)濃度藥物及0.2mmol.L-1皮質(zhì)酮的無血清DMEM(對照組不含任何藥品),培養(yǎng)48h,吸去培養(yǎng)液,用D2Hanks液洗2遍,每孔加入含0.5g#L-1MTT的無血清DMEM培養(yǎng)4h后吸去培養(yǎng)液,每孔加入10%十二烷基硫酸鈉100LL,待藍(lán)色顆粒完全溶解(約12~16h),用多孔掃描分光光度計(jì)測定標(biāo)本在570nm波長處的吸光度(A570nm)值,用于定量反映活細(xì)胞數(shù).