細胞生長檢測8：三磷酸腺苷檢測法（ATP法）

1． ATP 反應液（ Bio-Orbit ）是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、 0.5mmol 醋酸鎂、 50mg BSA 和 0.1 μ mol 無機焦磷酸。在 4 ℃可以保存 1 個月。用前用 10ml 含 2mmol/L EDTA 的 0.1mol/L pH7.75 Tris- 醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝后可在－ 20 ℃長期保存。

2． 在已經完成促增殖或抑生長試驗后的 96 孔細胞培養板中（每孔含 100 μ l 細胞培養液），每孔加 0.1ml ATP 釋放因子，室溫中反應 5 分鐘。取另一塊 96 孔細胞培養板，從第一塊板的各孔中吸 0.1ml 細胞溶解物到第二塊板的相應各孔。

3． 在低于 25 ℃中，將第二塊板置自動多孔熒光檢測儀中。用自動加樣器，每孔加入 20 μ l ATP 反應液，立即檢測 10 秒鐘的熒光強度。溫度升高，檢測敏感性就下降。

4． 用 RLU （ Y 軸）對細胞因子標準品的稀釋度（ X 軸）作標準曲線，根據標準曲線確定待測樣品中細胞因子的含量。