細胞轉(zhuǎn)染方法

物理方法
電穿孔(electroporition)
顯微注射(microinjection)
化學(xué)方法
磷酸鈣轉(zhuǎn)染(calcium phosphate transfection)
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(lipofectin transfection)
DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染(DEAE dextran-mediated transfection)

目前比較常用的方法是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，以下我簡單介紹一下：
轉(zhuǎn)染試劑：LipofectamineTM 2000
質(zhì)粒DNA：含有目的基因pEGFP-C1質(zhì)粒DNA
真核細胞：腫瘤細胞等
轉(zhuǎn)染目的：蛋白定位和轉(zhuǎn)染效率
（以轉(zhuǎn)染24孔板為例）
在轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細胞應(yīng)達到80%-90%覆蓋。一般要求，24孔培養(yǎng)皿,每孔500ul培養(yǎng)基0.5-2×105細胞。依據(jù)不同大小培養(yǎng)板調(diào)整每平方厘米的細胞數(shù)。
轉(zhuǎn)染當(dāng)天，加入脂質(zhì)體/ DNA混合物之前的短時間內(nèi)，更換500ul無血清無抗生素的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)2-24h。
混合A溶液于一個1.5ml離心管中：稀釋質(zhì)粒DNA（0.8ug）于50ul無血清培養(yǎng)基，輕輕混勻。
混合B溶液于另一個1.5ml離心管中：脂質(zhì)體lipofectamine試劑(2ul)溶于50ul無血清培養(yǎng)基中混勻,室溫孵育5min。
注意:脂質(zhì)體在用之前應(yīng)混勻;質(zhì)粒DNA/ LipofectamineTM 2000為1:0.5-1:5。
當(dāng)B溶液孵育5min后，混合溶液A和B，輕柔混合（不要振蕩），室溫孵育20min，以便脂質(zhì)體/DNA混合物形成。
加入上述100ul A/B混合液于含有細胞的培養(yǎng)基中，前后搖動以便輕輕混勻。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4-6hr。
4-6h后，用新鮮含血清培養(yǎng)基更換含有轉(zhuǎn)染復(fù)合物的不完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，18-48 h后測定細胞瞬時表達并進行熒光定位。
如穩(wěn)定轉(zhuǎn)染24hr后施加篩選壓力，改用含G418的培養(yǎng)基培養(yǎng)