釀酒酵母的篩選鑒定
釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),又稱面包酵母或者出芽酵母。釀酒酵母是與人類關系最廣泛的一種酵母,用于制作面包和饅頭等食品及釀酒。釀酒酵母的細胞為球形或者卵形,直徑5-10μm。其繁殖的方法為出芽生殖。釀酒酵母與同為真核生物的動物和植物細胞具有很多相同的結構,又容易培養,酵母被用作研究真核生物的模式生物。釀酒酵母被認為是最具潛力的大規模生產菌種。野生型釀酒酵母的主產物為乙醇。
釀酒酵母是第一個完成基因組測序的真核生物,測序工作于1996年完成。同時,釀酒酵母是發酵中最常用的生物種類。釀酒酵母具有生長周期短、發酵能力強、容易進行大規模培養以及含有多種蛋白質、氨基酸、維生素、生物活性物質等豐富的營養成分等優點,一直是基礎及應用研究的主要對象,在食品、醫藥等領域應用廣泛。 釀酒酵母也被用于其他具有重要工業價值代謝產物的發酵。
1、篩選
釀酒酵母的無性繁殖方式篩選。對液體培養基培養48h的酵母菌株,在16×40倍顯微鏡鏡檢,篩選出以多端出芽繁殖的菌株。 WL瓊脂培養基篩選釀酒酵母。將分離出來的酵母菌株,接種液體培養基活化24h后接種到WL瓊脂培養基,27℃培養Sd后觀察,篩選出菌落顏色為奶油色(淺黃色)至綠色,表面為球形突起,光滑,不透明,奶油狀的菌株。
賴氨酸培養基篩選。接種液體培養基活化24h后,按照1%接種量接種酵母到5mL無菌水中進行饑餓處理,5d后,接種到賴氨酸培養基,27℃培養5d后觀察是否有酵母生長,培養48h后沒有菌落出現的繼續培養,直到15d后仍無菌落生長說明可能是釀酒酵母。
2、鑒定
形態與培養特征。將菌種接種到液體培養基中,25℃培養3-7d,觀察是否發酵、培養液是否渾濁,是否形成環或島,沉淀量多少及松緊狀況,并制水浸片于顯微鏡下觀察,記錄酵母的無性繁殖方式與細胞的形狀。將酵母在瓊脂培養基上劃線,于28℃培養3-4d,觀察其菌落形態。
酵母假菌絲的觀察。將菌株在25℃活化后,在瓊脂平板上劃線接種(每個平板2-3條),在菌線上蓋上無菌蓋玻片,在28℃下培養5-10d。
酵母菌子囊孢子的觀察。把產子囊孢子培養基做成斜面;菌株在25℃瓊脂培養基活化1-2d后,接種到生孢培養基斜面上劃線,25℃培養3d,鏡檢是否有子囊孢子。凡未見孢子的在17℃左右保持4-6周,每周再檢查是否出現子囊孢子。