酵母遺傳學方法8：酵母活體染色

1 ）核 DNA 和線粒體 DNA

1． 當細胞培養到約 10⁷ 細胞 /ml 時，離心（ 5 秒）收集細胞，再懸浮在 70 ％乙醇中。

2． 固定 5 分鐘或 5 分鐘以上，用水洗 2 次。

3． 將細胞懸浮在含有 50ng/ml 的 4 ， 6- 二脒基 -2 苯基吲哚的封固劑中。 1mg/ml 的 4 ， 6- 二脒基 -2 苯基吲哚母液可在－ 20 ℃下貯存。

4． 用紫外濾片觀察。

2 ）線粒體

1． 在生長培養基中培養細胞達到約 10⁷ 細胞 /ml 時，加入 100ng/ml 3 ， 3’- 二已基 羰花青碘化物（ DiOC₆ ， Sigma D₃₆₅₂ 或 Molecular Probes ）用乙醇把 1mg/ml 母液稀釋到 1/10⁴ 。

2． 培養 5 分鐘或 5 分鐘以上，用熒光素濾片觀察。

3 ）液泡

1． 當細胞生長到約 10⁷ 細胞 /ml 時，離心收集細胞（ 5 秒），懸浮在含有 50mmol/L 檸檬酸鈉（ pH4.0 ）的 YPD 中。

2． 加 CDCFDA （羧基 -2’,7’- 二氯 - 熒光素雙乙酸鹽）到終濃度為 10 μ mol/L 。

3． 保溫 10 分鐘或 10 分鐘以上，用熒光濾片觀察。

4 ）牙痕和幾丁質

1． 用生長培養基培養細胞達 10⁷ 細胞 /ml 時，加 100 μ g/ml Calcofluor （熒光發光劑 28 ； Sigma F3543 ）（用水將 1mg/ml 母液稀釋到 1/10 ，母液可在－ 20 ℃下黑暗保存數星期）。

2． 培養 5 分鐘或 5 分鐘以上，用水洗 2 次，用紫外濾片觀察。