UVB致皮膚角質形成細胞的損傷模型的制作方法

材料和方法

1 試劑:胎牛血清(北京軍醫獸醫防治中心) ,DMEM培養液(GIBCO ,美國) ,碘化丙啶PI(Sigma) ,Triton2X100 (BDH) ,Hoechst33342(Sigma) ,RNase (Sigma) 。

2 細胞及實驗分組:人角質形成細胞株Colol6 (由北京師范大學生物系提供) 。分單純對照、單純照射、給藥后照射、照射后給藥4 組。給藥后照射組為在照射前24 h 給藥,照射后24 h 進行檢測,照射后給藥組為在照射后立即給藥,照射后24 h 進行檢測。

3 紫外光源及照射條件:光源為UVB 紫外燈管(上海金光燈具廠,6W) ,劑量率為6J?m- 2?min - 1 (由吉林大學環境衛生教研室進行測量) 。

4 藥物種類:人參三醇組甙、Rg1、Rb1 由吉林大學有機化學教研室提供。

5 細胞周期:胰酶消化貼壁細胞,接種于24 孔平底培養皿中(5 ×105 細胞P孔) ,每孔先加300μl DMEM 培養液(含15 %胎牛血清) ,待紫外線照射后,加至1 ml ,置37 ℃、5 %CO2孵箱中。收集細胞, 0101 molPL PBS 洗2 次, 加RNase (011mgPml) 100μl ,100μl PI(含Triton2X100) 單染37 ℃、30 min 避光保存,用流式細胞儀FACScan (Becton Diskinson ,美國,氬離子激光激發,波長488 nm) 檢測,每個樣品收集1 ×104 個細胞,數據采集分析軟件為ModFit LT。

6 細胞凋亡:加入100μl Hoechst33342 ,再加100μl PI(不含Triton2X100) ,0 ℃、陰暗處放置30 min ,用流式細胞儀收集1 ×104個細胞,Cellquest 軟件分析結果。
參見：金光輝,人參組甙對紫外輻射致皮膚角質形成細胞損傷的保護作用
另請參見：
夏濟平. 宋秀祖. 畢志剛. 茶多酚對紫外線輻射后的角質形成細胞和成纖維細胞增生影響的保護作用.臨床皮膚科雜志 2003年05期