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總RNA的提?。═rizol法提?。?/div>
發布日期:2024-02-01 16:52:10


總RNA的提?。═rizol法提?。?/strong>


在收集到生物材料之后,最好能即可進行RNA制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。


1. 提取組織RNA時,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解:提取細胞RNA時,先離心沉淀細胞,每5~106個細胞加1ml Trizol后,反復用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞;


2. 將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在試問15~30℃下放置5分鐘;


3. 在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2~8℃)離心15分鐘;


4. 去上層水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15~30℃)放置10分鐘后,12000g(2~8℃)離心10分鐘;


5. 棄上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進行洗滌,渦旋混合,7500g(2~8℃)離心5分鐘,棄上清;


6. 讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥;


7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

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