siRNA

-siRNA 

Small interfering RNA

是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），

由Dicer（RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。

SiRNA 是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。
 

越來越多的研究人員開始采用

小分子干擾RNA（small interfering RNAs，siRNAs)

來抑制特定的哺乳動物基因表達。

siRNA 是一種短片斷雙鏈RNA分子，

能夠以同源互補序列的mRNA為靶目標降解特定的 mRNA，

這個過程就是RNA干擾途徑（RNA interference pathway）。

siRNA化學合成
盡管化學合成是最貴的方法，但是卻是最方便的——研究人員幾乎不需要做什么工作。

主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，

為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了，

比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。
最適用于：已經找到最有效的siRNA 的情況下，需要大量siRNA 進行研究
不適用于：篩選siRNA 等長時間的研究，主要原因是價格因素.。

siRNA表達載體

多數的siRNA 表達載體依賴3種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，

操縱一段小的發夾siRNA 在哺乳動物細胞中的表達(1–4)。

這3類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子 。

之所以采用RNA pol III啟動子是由于它可以在哺乳動物細胞中表達更多的小分子RNA，

而且它是通過添加一串（3到6個）U來終止轉錄的。

要使用這類載體，

需要訂購2段編碼短發夾RNA序列的DNA單鏈，

退火，克隆到相應載體的pol III 啟動子下游。

由于涉及到克隆，這個過程需要幾天的時間，

同時也需要經過測序以保證克隆的序列是正確的。

不過幸好載體容易大量擴增，這個優點足以彌補所有缺陷，

特別是當載體在實驗中確實有效的時候。
毫無疑問，

siRNA 表達載體的優點在于這是眾多方法中唯一可以進行長期研究的方法——

帶有抗生素標記的載體可以在細胞中持續抑制靶基因的表達，持續數星期甚至更久。

即使是對轉染帶有篩選標記質粒的細胞進行瞬時篩選，也有助于富集帶質粒的細胞。

這也可以幫助解決一些難轉染的細胞由于轉染效率低造成的問題。
最近多個廠家開始研究逆轉錄病毒和其他病毒載體用于siRNA 表達，

其優勢在于可以直接高效率感染細胞進行基因沉默的研究 ，

避免由于質粒轉染效率低而帶來的種種不便。
最適用于：已知一個有效的siRNA 序列，需要維持較長時間的基因沉默，

或者需要用抗生素篩選能表達siRNA 的細胞。長期研究。
不適用于：篩選siRNA 序列

（其實主要是指需要多個克隆和測序等較為費時、繁瑣的工作）