哺乳動物組織樣品RNA的抽提

哺乳動物組織樣品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提過程中降解，以及盡可能得到最高的RNA抽提效率。以下介紹我們實驗室認為最符合以上兩個要素的抽提方法。

一、實驗材料：

Trizol試劑

研缽，勻漿器，鑷子，鋁箔都高溫滅菌即可；

二、具體過程：

1、樣品在離體后應(yīng)迅速冷凍在液氮中，若是比較大塊的組織，要盡量把組織剪切成黃豆大小的塊，使液氮迅速滲透到組織內(nèi)部而防止組織內(nèi)部的RNA降解。組織用鋁箔包好或放入凍存管中，并做好記號，注意不要把記號寫在紙上，以防紙被組織的血水滲透而導(dǎo)致記號模糊。可以把鋁箔放入紗布袋并儲存在液氮中。

2、在抽提RNA前，先把研缽預(yù)冷，往研缽內(nèi)反復(fù)加入液氮，至少4-5次，使研缽充分預(yù)冷。從液氮罐中取出樣本后，把組織塊放入已預(yù)冷的研缽中進行研磨，邊研磨邊加液氮（圖1），整個過程都不要使液氮揮干。一次研磨的組織塊重量不要超過300mg。

圖1 用研缽在液氮中把樣品研成粉末

3、研磨到組織樣品成粉末狀后（一般需要8-10min的研磨過程），在液氮基本揮發(fā)完時，在每個研缽中加2-3ml Trizol試劑。由于此時研缽很冷，Trizol加入后會凍結(jié)成固體狀（圖2）。可以繼續(xù)研磨此固體成粉末，隨著研缽溫度回升到室溫，固體狀的Trizol逐步回復(fù)到液體狀態(tài)，此時，若發(fā)現(xiàn)液體很粘，研杵能牽起絲狀物，說明Trizol的量太少，需在此步繼續(xù)補加Trizol。若Trizol的量過少，會導(dǎo)致抽提的RNA中有較多的基因組DNA污染。由于Trizol試劑中含有強烈的RNA酶抑制劑，因此組織樣品和Trizol充分研磨混勻后就不用擔(dān)心RNA的降解了。

圖2 在冰冷的研缽中加入Trizol試劑后 圖3 繼續(xù)把成固體狀的Trizol進行研磨
，Trizol試劑會凍結(jié)成固體