抗體或蛋白質中硫基的引入實驗
原理
材料與儀器
抗體或蛋白質溶液
AMSA 溶液 磷酸二氫鉀 氮氣 羥胺 EDTA
交聯葡聚糖 G-25 色譜柱
步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
在氮氣條件下，每 1 ml 抗體或蛋白質溶液加入 0.1 ml AMSA 溶液，密封試管并在室溫下緩緩攪拌 0.5 h。為移除乙酰基并暴露硫醇基團，需加入溶于 0.1 mol/L pH 7.0 Tris-HCl 的 0.2 ml 0.5 mol/L 羥胺、0.01 mol/L EDTA，調整至 pH 7.0。30℃ 放置 4 min。將混合物過柱（交聯葡聚糖）并用 0.1 mol/L pH 6.0 的磷酸二氫鉀及 5 mmol/L EDTA 洗脫。收集蛋白質組分（280 nm 下測定吸收值）并通過超濾濃縮至 1 ml。
常見問題
試劑：
AMSA 溶液（S-乙酰疏基丁二酸酐；Mr＝174.2；60 mg 溶于 1 ml N，N'-二甲基甲酰胺）
0.1 mol/L 磷酸二氫鉀，pH 7.0
抗體或蛋白質溶液（IgG，10 mg/ml 溶于 0.1 mol/L 磷酸二氫鉀，pH 7.0）
氮氣
0.5 mol/L 羥胺（NH2OH·HCl，Mr＝69.5），0.01 mol/L EDTA（Mr＝292.3）溶于 0.1 mol/L Tris-HCl pH 7.0（3.46 g NH2OH·HCl，0.29 g EDTA 溶于 100 ml 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸二氫鉀）
交聯葡聚糖 G-25 色譜柱，約 1.5 cm×30 cm，用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氫鉀平衡
5 mmol/L EDTA
