二氨基己基間隔物的結合實驗

原理

材料與儀器

蛋白質
磷酸二氫鉀 NaCl N-乙基-N'-（3-二甲氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽 HCl

步驟

實驗所需「試劑」具體見「其他」

連接間隔物的步驟與連接蛋白質相同（見「蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合」），只是用 1 mg/ml（描述步驟用 20 mg/20 ml）1，6-己二胺代替蛋白質。用 0.5 mol/L NaCl 洗掉己基衍生物（AH-瓊脂糖）

為將蛋白質連接在間隔物上，需用 1 mol/L HCl 將 pH 調節到 4.5。隨后加入 N-乙基-N'-（3-二甲氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（10 mg/ml 膠）和蛋白質（10 mg/ml）。最終 pH 必須保持 4.5。將混合物 4℃ 振蕩過夜（1 h 后調整 pH）。最后用 0.1 mol/L pH 7.6 磷酸二氫鉀沖洗凝膠。

常見問題

試劑：

0.1 mol/L pH 7.6 磷酸二氫鉀

1，6-己二胺（Mr＝116.2）

0.5 mol/L NaCl（Mr＝58.4；2.92 g/100 ml）

N-乙基-N'-（3-二甲氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC·HCl，Mr＝191.7）

1 mol/L HCl