于點擊化學進行靶點鑒定的具體步驟與方法

點擊化學又稱“鏈接化學”或“動態組合化學”，旨在通過小單元的拼接，來快速、可靠地完成各種類型分子的化學合成。該反應尤其強調開辟以碳-雜原子鍵（C-X-C）合成為基礎的組合化學新方法，其代表反應為銅催化的疊氮-炔基的環加成反應。點擊化學反應有如下優點：

（1）可在細胞內發生，利于原位直接找到藥物作用靶點；

（2）合成反應快速、副產物對細胞無毒害；

（3）操作簡單、條件溫和、對水與氧等環境不敏感。科學家們通過有機合成的方式在活性分子上引入炔烴等生物正交基團，在不影響其藥理活性的前提下合成得到功能化衍生物，隨后將該功能化衍生物與細胞共孵育，使其與靶標蛋白結合，最后利用點擊反應再將疊氮修飾的報告基團（生物素或熒光）連接到探針-靶標蛋白復合物上，進而對靶標進行檢測、富集和鑒定（圖1）

采用點擊化學的方式進行靶點鑒定，通常需要3個步驟，具體包括：

（1）小分子探針的設計與合成，隨后將該探針與細胞共孵育后實現與靶蛋白的特定位點發生共價結合；

（2）通過點擊化學反應，將已與靶蛋白發生共價結合的分子探針與報告基團相連（圖2）；

（3）對所識別的靶標進行純化、富集和鑒定