使用活體熒光染料的顯微鏡定量凋亡指數和細胞活力（臺盼藍染色）

原理

材料與儀器

細胞
染料混合物：0.01%臺盼藍 l00μg ml吖啶橙 或 100μg ml吖啶橙+100 μg ml溴化乙錠 所有試劑都在PBS中制備 約5×105?5×106細胞 ml的細胞懸浮液在完全的RMPI 1640培養基
12 mm×75 mm的玻璃試管 顯微鏡載玻片和22 mm2的蓋玻片 配有熒光過濾裝置的熒光顯微鏡

步驟

1a)將10?20μL的臺盼藍放至12 mm×75 mm的玻璃試管的底部。加入等量的混合很 好的細胞懸浮液，輕動手腕輕柔地混合。

2a)將10μL的混合液加入一標準血細胞計數器的凹槽里。用一明場顯微鏡的40×?60 ×的干物鏡檢查。

3a)計數至少200個細胞，記錄正常和凋亡或死亡細胞的數量。

早期凋亡時細胞由于臺盼藍的排斥呈現白色，但它們將會有不規則的形狀或縮攏的核。

4a)計算凋亡細胞的百分比（凋亡指數）如下：

調亡細胞％ = (VN+NVA)/(VN+VA+NVN+NVA) ×100%

壞死細胞％ =NVA/(VN+VA+NVN+NVA)× 100%

死亡細胞％=(NVN+NVA)/(VN+VA+NVN+NVA)× 100%

注意事項

除非細胞用于流式細胞儀或其他不需要細胞進一步體外培養的處理方式，所有的和細胞接觸的溶液及儀器都必須是無菌的，需采取相應的無菌技術。