Hoechst 染色實驗
原理
1. 用水按 1:500 稀釋1 mg/ml 的Hoechst 染液至終濃度2 μg/ml。將稀釋染液加于切片上或將玻片浸于染液中,置室溫2 min。
2. 室溫下,在水中洗2 min,晾干。
3. 在 42℃ 至 55℃ 烘箱中,烘烤玻片 30~60 min,取出置室溫。
4. 用 0.5 g/ml 加拿大香柏油為介質,加上蓋玻片,將玻片置室溫干燥 2 天。
5. 用 Hoechst 落射熒光鏡頭觀察細胞核,用紅色濾光片蓋住光源并同時以暗視場觀察銀粒。銀粒將顯示紅色且與顯示藍色熒光的細胞核形成鮮明對比。如欲照像,可對細胞核和銀色的顆粒進行二次曝光。
材料與儀器
【材料】細胞
【試劑】Hoechst染料 二甲基亞砜染料 二苯亞胺 甲基水楊酸;
【儀器】熒光顯微鏡 水浴鍋 烘箱 培養箱
步驟
1. 用水按 1:500 稀釋 1 mg/ml 的Hoechst 染液至終濃度 2 μg/ml。將稀釋染液加于切片上或將玻片浸于染液中,置室溫 2 min。
2. 室溫下,在水中洗 2 min,晾干。
3. 在 42℃ 至 55℃ 烘箱中,烘烤玻片 30~60 min,取出置室溫。
4. 用 0.5 g/ml 加拿大香柏油為介質,加上蓋玻片,將玻片置室溫干燥 2 天。
5. 用 Hoechst 落射熒光鏡頭觀察細胞核,用紅色濾光片蓋住光源并同時以暗視場觀察銀粒。銀粒將顯示紅色且與顯示藍色熒光的細胞核形成鮮明對比。如欲照像,可對細胞核和銀色的顆粒進行二次曝光。
注意事項
1. 勿用 Permaunt,因在觀察細胞核時會出現自發突光,加拿大香柏油能很好地顯現石蠟切片并在紫外照射下不發熒光,Gelvatol 可用于冰凍切片,但不應用于石蠟切片,因其不能顯現組織成分。