腫瘤細(xì)胞的染色體標(biāo)本制備

原理

利用腫瘤細(xì)胞無限繁殖的特點(diǎn)，掌握其體外生長動(dòng)態(tài)，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞便可獲得豐富的分裂相。腫瘤細(xì)胞染色體異常包括兩個(gè)方面：1.  結(jié)構(gòu)異常  即在腫瘤細(xì)胞常出現(xiàn)的染色體畸變，包括雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體、斷裂的染色體、染色體裂隙及微小體等。2.  數(shù)目異常  由于腫瘤細(xì)胞分裂失去應(yīng)有的調(diào)控，可出現(xiàn)亞二倍體、超二倍體和多一倍體數(shù)目異常現(xiàn)象。腫瘤細(xì)胞染色體制備技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的基礎(chǔ)研究和臨床診斷、愈后觀察等方面均有廣泛用途。

材料與儀器

HL—60細(xì)胞 HeLa細(xì)胞
640培養(yǎng)液 肝素溶液 秋水仙素 胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇 冰醋酸 Giemsa原液 磷酸緩沖液 生理鹽水
超凈臺 鑷子 離心機(jī) 水浴箱 天平 離心管 顯微鏡 載玻片 平皿

步驟

1.  以1.6x 105個(gè)/ml 細(xì)胞濃度將FL-60細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)。
2.  48小時(shí)后以終濃度為0.04ug/ml 的秋水仙素處理2.5小時(shí)，移入10 ml 離心管。
3.  其余步驟與淋巴細(xì)胞染色體制備相同。

4.  將長成單層的HeLa細(xì)胞按1：2傳代進(jìn)行培養(yǎng)，36小時(shí)后用終濃度為0.04 ug/ml 的秋水仙素處理3小時(shí)。
5.  按時(shí)終止培養(yǎng)，用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液處理單層細(xì)胞，待細(xì)胞收縮變圓時(shí)，棄去消化液。
6.  加入少許低滲液將細(xì)胞從瓶壁洗脫，移入10 ml 離心管，加入預(yù)熱37℃的低滲液至5~6 ml，在37℃處理25分鐘。
7.  以下步驟同淋巴細(xì)胞染色體核型制備。

8.  結(jié)果：計(jì)數(shù)HeLa細(xì)胞和HL-60細(xì)胞的染色體數(shù)并尋找是否有畸變的染色體。