細(xì)胞核的分級(jí)分離實(shí)驗(yàn)

材料與儀器

小白鼠
蔗糖 氯化鈣溶液 甲苯胺蘭染液 詹納斯綠B染液 NaCl溶液
玻璃勻漿器 離心機(jī) 天平 光學(xué)顯微鏡 載玻片 蓋玻片 離心管 滴管 量筒 燒杯 玻璃漏斗 解剖剪 鑷子

步驟

1.  用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開(kāi)腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結(jié)締組織）盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。

2.  將濕重約1 g 的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8 ml 預(yù)冷的0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。

3.  剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3~5次，用3層紗布過(guò)濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標(biāo)記，自然干燥。

4.  將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機(jī)，以2500 rpm，離心15分鐘。
（1）緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用。
（2）同時(shí)涂一張上清液片②做好標(biāo)記，自然干燥。
（3）余下的沉淀物進(jìn)行下一步驟。

5.  用6 ml 0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500 rpm 離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。

6.  將①、②、③涂片用1%甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。