過碘酸雪夫反應(PAS)

原理

組織、細胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法來顯示，其化學基礎是利用過碘酸的氧化作用，打開碳鏈形成醛，生成的醛基與Schiff試劑中的無色品紅反應形成紫紅色化合物。

材料與儀器

小白鼠
PBS緩沖液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固綠 硫酸銅 聯(lián)苯胺混合液 番紅 過碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亞硫酸水 蘇木精 Carnoy固定液
光學顯微鏡 解剖器材 蠟盤 載玻片 吸水紙 染色缸 蓋玻片 水浴箱

步驟

一、方法

1.  取1~2 mm 厚的肝組織塊，用Carnoy氏液4℃固定4~6小時。

2.  乙醇脫水、二甲苯透明。石蠟包埋，切片。

3.  用70%乙醇展片。

4.  脫蠟：二甲苯（1）5分鐘→二甲苯（2）5分鐘→100%乙醇5分鐘→含1%火棉膠的乙醇液1分鐘→70%乙醇1分鐘。

5.  直接浸入過碘酸酒精液反應5~15分鐘，經(jīng)70%乙醇洗片刻。

6.  浸入Schiff氏酒精液反應15分鐘。

7.  亞硫酸水洗三次，以洗去多余的非特異性結合的色素，以及擴散的染料。

8.  流水沖洗3~5分鐘。

9.  蒸餾水洗。

10.  浸入Ehrlich蘇木精復染20~30秒，使細胞核著色。

11.  脫水：95%乙醇3分鐘二次→100%乙醇3分鐘二次→二甲苯透明10分鐘二次。

12.  加蓋片鏡檢或樹膠封固后鏡檢。

二、結果

細胞中呈紫紅的顆粒即為糖原。