星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基無血清ACM-SF的培養(yǎng)方法研究
一、背景及概述
星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最豐富的細胞。星形膠質(zhì)細胞具有多種生物學功能，如支持參與血腦屏障形成的內(nèi)皮細胞，為神經(jīng)元提供營養(yǎng)，維持細胞外離子平衡，促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)的修復。星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基-無血清 ACM-SF已廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)神經(jīng)元和內(nèi)皮細胞。
二、培養(yǎng)方法研究
徐立新等人探索應(yīng)用無血清培養(yǎng)基進行大鼠星形膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)的方法。
方法：取出生24 h內(nèi)Wistar大鼠大腦皮質(zhì)組織,機械吹打分散為單細胞后在無血清培養(yǎng)基中進行原代培養(yǎng)。細胞傳代時分別使用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰酶或胰酶作為消化液,濃度為0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTL)終止消化作用,按照1:2或1:3的比例傳代。
顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)細胞免疫熒光染色方法鑒定細胞表型,MTT法檢測傳代細胞增殖情況。結(jié)果：細胞懸液靜置15 min后更換新的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng),7 d后顯微鏡下可見細胞生長良好,折光性強,胞體小而突起長;細胞免疫熒光染色鑒定顯示>95%的細胞為GFAP陽性細胞。
與應(yīng)用SBTI終止胰酶反應(yīng)時未進行離心比較,低溫、低速離心(4℃、3 000×g)3 min后,傳代細胞可在無血清培養(yǎng)基中生長正常并增殖。MTT檢測結(jié)果顯示,EDTA-胰酶消化效果優(yōu)于胰酶(A值分別為0.290±0.007、0.270±0.006,P<0.010);使用濃度為0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI終止消化(A值分別為0.290±0.013、0.290±0.017,P=0.820)及以1:2或1:3比例傳代(A值分別為0.340±0.070、0.320±0.030,P=0.770),傳代星形膠質(zhì)細胞數(shù)量的差異均無統(tǒng)計學意義。
結(jié)論：本研究建立無血清培養(yǎng)基進行大鼠星形膠質(zhì)細胞原代及傳代培養(yǎng)的方法,為避免血清干擾更好地開展體外星形膠質(zhì)細胞功能的研究提供了新的細胞模型。
