骨髓細胞單細胞懸液的制備

材料與儀器

骨髓液
肝素抗凝劑 PBS

步驟

1. 無菌抽取骨髓液 0.5 ml。

2. 將骨髓標本滴入含 1000 U/ml 肝素抗凝劑的 1 ml PBS 液中。

3. 再加入 PBS 液稀釋至 10 mI。

4. 用吸管吸取 5 ml 稀釋骨髓液徐徐加入盛有 4 ml 的人類淋巴細胞分離液液面之上。

5. 在以上條件下，骨髓有核細胞分層在 PBS 人類淋巴細胞分離液之間形成的界面上。

6. 吸取有核細胞層，加入到 10 ml PBS 液中，混勻。

7. 以 1000 r/min 離心 5 min，棄上清；收集骨髓細胞，加固定液或置低溫冰箱備用。

注意事項

1. 抽骨髓液時，先將注射器針頭、針筒、針栓用肝素浸潤，抽取時力量適中。

2. 在吸取淋巴細胞層時盡量少吸分離液，吸取量應掌握在 300 ul 左右，這樣有利于洗去多余的分離液。

3. 溶紅細胞的方法：以等量的蒸餾水加入到沉淀中，輕輕搖動片刻，見粉紅色出現，立即加入大量生理鹽水，混勻，離心，去除上清即可。