活細(xì)胞表面抗原的熒光染色（直接免疫熒光）

材料與儀器

細(xì)胞 初始抗體
PBS 溶液 疊氮化鈉

步驟

1. 在培養(yǎng)皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，輕搖，收獲細(xì)胞。4℃ 1000 g 離心 5 分鐘。

2. 用 4 ml PBS+0.1% 疊氮化鈉和 1% BSA 或熱的滅活血清洗細(xì)胞。

3. 計數(shù)細(xì)胞，每個樣品的最小濃度為 1X106/ml。

4. 將樣品等分為 50 μl 小體積的含 0.1% 疊氮化鈉和 1% 熱的滅活血清或 1% 的 PBS 溶液。

5. 加合適滴度的初始抗體，用系列稀釋確定合適滴度范圍。

6. 在冰上孵育細(xì)胞 30 分鐘。

7. 在含疊氮化物和 BSA 或熱的滅活血清的 4 ml PBS 中洗細(xì)胞。

8. 1000 g 離心細(xì)胞 5 分鐘。

9. 在相近體積的含 0.1% 疊氮化物和 1% BSA 中重懸細(xì)胞，終濃度為 1X106~5X106 /ml。