單層培養細胞的透化

材料與儀器

細胞培養物
HEPES
培養基

步驟

1. 約在實驗開始前 1 小時，將細胞培養物換上含有預熱（37℃）的 20 mmol/L HEPES（pH 7.2）的培養基，繼續培養。讓細胞在實驗前與新培養基達成平衡。

2. 將所需數量的有細胞的培養基放在一個絲網托盤上，放入 37℃ 溫箱再平衡 10 分鐘。細胞在這種狀態下能保持穩定 1 小時左右，這取決于培養基的蒸發速度。

3. 吸去培養基，立刻用預熱的胞外緩沖液沖洗。

4. 去胞外緩沖液，換上透化緩沖液，加 60 單位/ml 的鏈球菌溶血素 O 儲存液至終濃度 0.6 單位/ml。同時加 10 mmol/L 的冷 ATP 儲存液至終濃度 100 μmol/L。

5. 37℃ 孵育處理過的細胞 1~5 分鐘。

6. 加 [γ-32P] ATP 儲存液至終濃度 50~500 μCi/mI。

7. 加入要研究的實驗試劑，如藥理試劑、多肽、Fab' 片段，放置一段時間讓它們發揮作用。

8. 加入所需的受體激動劑。

9. 制備用于免疫沉淀分析的樣品或者聚丙烯酰胺凝膠電泳樣品。