病毒滅活試驗——有機溶劑滅活法

原理

有機溶劑滅活病毒的原理在于它們破壞病毒結構的能力，有機溶劑可以溶解包括病毒的脂質包膜，或破壞無包膜病毒的蛋白質衣殼。通過與病毒成分相互作用，有機溶劑使病毒結構不穩定，導致感染性喪失。

1. 病毒包膜：一些病毒，如包膜病毒，在病毒衣殼周圍有一個外部脂質包膜。 這種包膜來源于宿主細胞膜，在病毒感染細胞的能力中起著至關重要的作用，有機溶劑可以溶解其包膜。

2. 脂質破壞：當有機溶劑與病毒包膜接觸時，它可以溶解脂質膜，導致包膜完整性破裂。

3. 衣殼損傷：有機溶劑還可以直接影響病毒衣殼，它是包裹病毒遺傳物質的蛋白質外殼。 溶劑可以使衣殼蛋白變性或破壞，導致病毒結構完整性的喪失。

4. 感染性喪失：通過破壞病毒包膜和/或衣殼，病毒變得無法附著和進入宿主細胞，使其失去感染性，傳染性的喪失意味著病毒不再能夠在宿主內引起感染或復制。

材料與儀器

甲醛溶液，病毒樣本，中和試劑，無菌管，移液器等。

步驟

1、甲醛溶液的配制：

首先確保工作區域通風良好，戴上個人防護裝備，包括護目鏡、手套和實驗室外套，使用 PBS 將純甲醛溶液稀釋至所需濃度，病毒滅活的推薦濃度通常在 0.01 % 到 2 % 之間，相應地調整甲醛和 PBS 的體積。

2、樣品制備：

將病毒樣本轉移到無菌試管或容器中，確保病毒樣本的體積和濃度適當，以便有效滅活。

3、甲醛處理：

將準備好的甲醛溶液添加到病毒樣品中，確保足夠的濃度以有效滅活病毒。輕輕混合。將混合物在合適的溫度下（如 37 ℃）孵育，孵育時間通常為 24 h 至 48 h，具體取決于特定的病毒和甲醛濃度。

4、中和：

在所需的孵育時間后，向混合物中添加合適的中和劑以停止甲醛的活性。常見的中和劑包括亞硫酸氫鈉，硫代硫酸鈉等。中和劑應加入足量以達到中和作用。

5、驗證：

將滅活的病毒接種在正常細胞上，傳代培養，觀察是否有病變，如無病變，則表明滅活成功。

注意事項

在使用有機溶劑滅活病毒時，重要的是要采取預防措施，以確保安全并防止傳染原的傳播。以下是一些需要考慮的注意事項：

1. 佩戴好手套、實驗外套或防護服及口罩，以保護自己免受有機溶劑和任何潛在病毒顆粒的接觸。

2. 有機溶劑與實驗中使用的表面、設備和材料可能有相容性。可能具有腐蝕性或與某些材料相互作用，從而導致損壞或污染。

3. 妥善處理有機溶劑的意外泄漏，準備好適當的溢出物套件和吸收材料，并遵循既定程序來控制、清理和處置溢出物。

4. 妥善處置受污染的材料，包括用過的溶劑、傳染性廢物。

有機溶劑滅活病毒的有效性取決于幾個因素，包括溶劑的濃度和暴露時間、病毒類型以及病毒結構的穩定性。重要的是要優化每種特定病毒的條件，以確保完全有效地滅活，同時為后續應用（例如疫苗開發或診斷測定）保留病毒抗原的完整性。