人類免疫缺陷病毒標本采集及處理方法

簡介

艾滋病檢測最常用的標本是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時也可作為測試樣品。標本采集和處理參照《全國艾滋病檢測技術規范（2009年版）》。

原理

人類免疫缺陷病毒標本采集及處理方法的基本原理是 HIV 感染的診斷是以實驗室檢查為基礎，結合臨床表現和參考流行病學資料綜合進行。實驗室檢查需根據檢測目的和檢測項目不同，采集不同標本種類。

材料與儀器

器材：真空采血管或一次性注射器、采血針、離心機等。

步驟

人類免疫缺陷病毒標本采集及處理方法的基本過程可分為如下幾步：

（一）標本采集

A 血液

① 靜脈血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（或未加抗凝劑）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉移至加有抗凝劑（或未加抗凝劑）的試管中，輕輕顛倒混勻 6~8 次，備用；

②末梢血（通常為指尖血）：消毒局部皮膚（成人和 1 歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或示指。1 歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌棉簽擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。

B 尿液

使用清潔的容器收集尿液。女性應避開月經期。尿液樣品可以在 2~8 ℃ 存放。

C 唾液

使用檢測試劑盒提供的容器收集唾液樣品。

（二）標本處理

用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應在 4~8 小時內分離 PBMC 和血漿，否則應在 24~48 小時內分離血漿和血細胞。

A 血漿：將采集的抗凝全血 1500~3000 r/min 離心 15 分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。

B 血清：根據需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取 5~10 ml 靜脈血，室溫下自然放置 1~2 小時，待血液凝固、血塊收縮后再用 1500~3000 r/min 離心 15 分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。

C 淋巴細胞富集液：將采集的抗凝全血 1500~3000 r/min 離心 15 分鐘，吸取血漿層下的淋巴細胞富集液，置于合適的容器中，備用。

D PBMC：使用淋巴細胞分離液，進行密度梯度離心，吸出 PBMC 層，備用。

注意事項

1 采樣時間：采集抗凝全血用于 CD4+ T 淋巴細胞測定時，由于 CD4+ T 淋巴細胞數存在日間自然變化的個體差異，每一患者采樣時間應盡可能集中在某個相同的時段。如：每次采樣時間均在上午或均在下午。

2 采集要求：采樣前要檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內，有無破損，是否足量，特別應檢查受檢者信息與樣品容器表面的標記是否一致，并注明樣品采集時間。

抽取靜脈血液（或以其他方式收集血液樣品）時要注意安全，應使用一次性注射器或一次性真空采血管，采血部位要嚴格消毒，戴手套，謹慎操作，防止刺傷皮膚和造成外界環境污染。不在現場檢測的樣品，通常采集 5 ml 靜脈血，現場分離血清或血漿后直接送到相關的檢測點或篩查實驗室。

采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險品容器里，妥善處理，防止發生職業暴露，遵守生物安全要求。

3 樣品的保存：① 用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應存放于 - 20 ℃ 以下，短期（1 周）內進行檢測的樣品可存放于 2~8 ℃；② 用于抗原和核酸檢測的血漿和血細胞樣品應凍存于 - 20 ℃ 以下，進行病毒 RNA 檢測的樣品如需保存 3 個月以上應置于 - 80 ℃；③ 用于 CD4+/CD8+ T 淋巴細胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過 48 小時則不可檢測。

4 標本的包裝與運送：實驗室間傳遞的樣品應為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。標本運送時應采用三層容器進行包裝，隨樣品應附有與樣品唯一性編碼相對應的送檢單。送檢單應標明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應放置在第二層和第三層容器之間。樣品的運送應符合生物安全要求，要獲得相應部門批準并由具有資質的人員專程護送。