人類免疫缺陷病毒直接檢測方法

簡介

人類免疫缺陷病毒直接檢測方法包括抗原檢測、核酸檢測、病毒分離培養(yǎng)等，直接檢測病毒的存在。病毒分離培養(yǎng)一般不作為常規(guī)診斷。

原理

人類免疫缺陷病毒直接檢測方法的基本原理是在一些特殊情況下，當抗體檢測無法滿足 HIV 感染診斷的需要時，如：處于窗口期的 HIV 感染者，機體尚未產(chǎn)生抗體，可以通過測定血清中 p24 抗原進行輔助診斷。

材料與儀器

器材：酶標儀等。

步驟

人類免疫缺陷病毒直接檢測方法的基本過程可分為如下幾步：

（一）1．HIV-1 抗原檢測

A 通常采用夾心法 EIA（enzyme immunoassay，EIA），即將純化的已知抗體包被在固相反應板孔底，當加入待測血清后，若血清中含有 p24 抗原則與包被抗體形成抗原-抗體復合物，再加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的 HIV 抗體，在抗原上又結(jié)合了酶標記的抗體，加底物顯色后，在酶標儀上讀結(jié)果。

為提高檢測血清中 p24 抗原的敏感性，將血清中免疫復合物解離（immune-complex disassociate，ICD）后再進行測定，發(fā)展了 ICD p24 抗原測定試劑，用于 HIV p24 抗原測定。

（二）HIV 核酸檢測

應用 PCR 技術(shù)檢測外周血淋巴細胞中 HIV 的前病毒 DNA 序列，或用反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）法檢測血漿中游離 HIV RNA。HIV 核酸檢測有定性和定量兩類：

A HIV 核酸定性測定：定性檢測用于 HIV 感染的輔助診斷，HIV 核酸檢測陰性，只可報告本次實驗結(jié)果陰性，不可排除 HIV 感染，HIV 核酸檢測陽性，可作為診斷 HIV 感染的輔助指標，不單獨用于 HIV 感染的診斷。

檢測方法為商品化試劑盒和實驗室自建方法，商品化試劑盒應嚴格按說明書操作；實驗室自建方法使用反轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）法時包括核酸提取、反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，PCR 擴增反應、擴增產(chǎn)物分析等步驟。

B HIV 核酸定量測定：對感染或患者體內(nèi)游離病毒核酸 RNA 含量的定量測定。HIV 核酸定量檢測的意義：監(jiān)測 HIV 感染者的病程進展、HIV 感染早期診斷以及抗病毒治療效果等。目前常用定量 RT-PCR 檢測血漿（清）標本中 HIV RNA 的拷貝數(shù)或國際單位來表示（c/ml 或 IU/ml），亦稱病毒載量（virus load），即患者血漿（清）中 HIV RNA 的數(shù)量，比 CD4+ T 細胞計數(shù)更能反映抗病毒治療效果。目前使用的病毒載量測定技術(shù)主要基于靶核酸擴增 RT-PCR 和信號放大擴增兩種方法。測定結(jié)果小于最低檢測限時，注明最低檢測限水平。低于最低檢測限的結(jié)果不能排除 HIV 感染。

注意事項

HIV RNA 水平測定應避免在患者急性感染期（如細菌性肺炎、結(jié)核感染、卡氏肺孢子菌肺炎等）和免疫接種期進行，因此時（2~4 周）血漿 HIV RNA 可升高。血漿 HIV RNA 的測定應在同一實驗室用同一方法進行，并在決定開始治療或調(diào)整方案時重復驗證。