人類免疫缺陷病毒抗體檢測方法

簡介

HIV 抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監測等。大多數人從 HIV 感染到測到抗體大約需要 6~12 周的時間，在這段時間，HIV 抗體檢測不能識別出在抗體形成前即處于窗口期的感染者。窗口期的存在，使患者輸入 HIV 抗體陰性的血液后仍可感染 HIV。HIV 感染 6 個月后所有感染者均抗體陽性。檢測抗體的假陽性和假陰性率都很低，準確率可達 99％，且價格低廉，可以應用于整個病程的監測，HIV 抗體在病毒感染后的整個感染過程中長期穩定地存在并可被檢測到。

原理

人類免疫缺陷病毒抗體檢測方法的基本原理是檢測血清中 HIV 抗體可作為判定 HIV 感染的證據。HIV 抗體檢測是一種間接試驗，通過發現抗體而確定感染的存在。這種證據不能確定病毒的存在。

材料與儀器

無

步驟

人類免疫缺陷病毒抗體檢測方法的基本過程可分為如下幾步：

HIV 抗體檢測程序分為篩查試驗（包括初篩和復檢）和確證試驗。根據檢測目的選用符合要求的初篩試劑對樣品進行初篩檢測，對呈陰性反應的樣品，可出具 HIV 抗體陰性（-）報告；對呈陽性反應的樣品，需要進一步做復檢試驗和確證試驗。復檢試驗應使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行。如兩種試劑復檢均呈陰性反應，則報告 HIV 抗體陰性（-）；如均呈陽性反應，或一陰一陽，須送艾滋病確證實驗室進行確證試驗。艾滋病檢測初篩實驗室復檢判定為陽性反應的樣品，確證實驗室可以直接進行確證試驗。

（一）HIV 抗體篩查試驗用于篩查試驗的方法要求敏感性高，不能出現假陰性，但允許有少量假陽性。常用以下幾種方法：

A 酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）：是最常用的初篩方法，能同時檢測大量樣品，適應于大規模普查?？墒褂醚?、唾液、尿液樣品，ELISA 多為單純 HIV 抗體檢測試劑。HIV 抗原抗體聯合檢測試劑可同時檢測血液中的 HIV p24 抗原和 HIV-1/2 抗體。HIV 抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標記的 HIV 抗原或抗體，加底物顯色，用酶標儀測定結果。

B 化學發光或免疫熒光試驗：這類試劑采用發光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯合檢測抗原抗體。HIV 抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標記的 HIV 抗原或抗體，加發光或熒光底物，用發光或熒光儀測定結果。

C 快速檢測（rapid test，RT）試驗：這類試驗簡便快速，一般可在 10~30 分鐘內得出檢測結果，標本容易采集，只需較少的實驗設備，可以直觀的判定和解釋結果，適用于應急檢測、門診急診檢測。HIV 快速檢測試驗按原理不同可分為以下三類：

1）免疫滲濾試驗：斑點 ELISA 和斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗，均以硝酸纖維膜為載體，HIV 抗原點狀固定在膜上，加入待檢樣品后，陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應時間在 10 分鐘以內。有效試驗的質控點必須顯色。

2）免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體，HIV 抗原線狀固定在膜上，加入待檢樣品（血液或唾液）后，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗的質控帶必須顯色。

3）明膠顆粒凝集試驗：是 HIV 血清抗體檢測的一種簡便方法。將 HIV 抗原致敏明膠顆粒作為載體，加入待檢樣品。當待檢樣品含有 HIV 抗體時，明膠顆粒與抗體發生凝集反應，根據凝集情況判讀結果。明膠顆粒凝集試驗的試劑有兩種：同時檢測 HIV-1 和 HIV-2 抗體以及分別檢測 HIV-1 和 HIV-2 抗體。

（二）HIV 抗體確證試驗依據《全國艾滋病檢測技術規范（2009 年版）》，HIV 確證方法有免疫印跡試驗（Western blot，WB）、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）等。

A 免疫印跡試驗是目前最常用的方法，原理是顯示待測血清中特異的 HIV 抗體蛋白。將 HIV 裂解后，其不同的蛋白成分通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-polyacrylamidegel）電泳，使 HIV 蛋白按其分子量大小不同，分為不同的區帶，排列于凝膠上，形成若干條特異的 HIV 蛋白區域。通過印跡技術轉移到硝酸基纖維膜上，將硝酸基纖維膜切成細的試紙條，加入待測血清共同孵育，抗 HIV 的特異蛋白抗體與其對應的抗原蛋白結合。漂洗掉非特異結合的血清成分，加入酶標抗人 IgG 共同孵育，使酶標抗體與被結合的待測血清抗體結合，漂洗后與酶底物反應，顯色。不同的特異抗體在硝酸基纖維膜上的特異 HIV 蛋白區域形成顏色沉淀帶，通過肉眼可以觀察反應部位上的顏色反應，來判斷結果。由于不同的抗原蛋白在診斷中有不同的意義，因此不同帶型的出現，可以為診斷提供較準確的信息。