腹瀉病毒標本的采集與處理
簡介
腹瀉病毒主要從糞便中排出,所以糞便標本是用于腹瀉病毒診斷性檢測的要標本。在某些情況下,嘔吐物和血清樣本也可用于實驗室檢測。在疾病發病的前幾天,標本中存在較大量的病毒,之后下降,但是低水平的排毒可以持續數周時間。
因此,從發病前幾天收集的標本中進行病毒檢測獲得的陽性率最高。通常,肛拭子標本一般因含病毒顆粒數量較少,病毒不太可能從中檢出,不如糞便標本常用。
材料與儀器
器材:
①一次性無菌手套
②采集管
試劑:
①材料:采集標本
②標本緩沖液
步驟
腹瀉病毒標本的采集與處理基本過程如下:
一、腹瀉病毒標本的采集
(1)用于直接檢測病毒的糞便標本,發病后應立即采集,將幾克糞便標本盛于清潔的塑料或玻璃容器內,密封后送往實驗室。
(2)水樣便可用吸管吸至塑料或玻璃容器內,密封后送實驗室。
(3)從腹瀉患兒尿布中采集的糞便可以通過幾種方式進行處理:
可以將尿布上面平鋪一層塑料布,或者翻轉一次性尿布使塑料面貼在兒童皮膚上以免腹瀉的糞便浸入尿布;另一種方法是,可以用木質的壓舌板從尿布中刮取部分腹瀉的糞便,或者剪下一片尿布,將剪下的尿布浸在無菌的水中或者磷酸鹽緩沖液中。有時也使用經十二烷基硫酸鈉-EDTA處理的色譜紙條來收集、轉運和儲存糞便標本。
二、腹瀉病毒標本的處理
用于核酸擴增,糞便標本中經常存在抑制PCR反應體系中酶的活性的物質,妨礙病毒核酸的檢測,最簡單的方法就是將糞便稀釋成10% 的懸液后進行后續實驗。
為了提高病毒的穩定性,經常會將培養基、防腐劑、胎牛血清或者洗滌劑加到其他用于病毒診斷的臨床樣本中,但是這些物質會干擾某些用于腹瀉病毒的檢測方法(例如酶聯免疫實驗和乳膠凝集試驗)的準確性,所以不應該加在糞便標本中。標本一旦送達實驗室,就應該儲存在4 ℃,在此溫度下可以放置幾天至數周。需要長時間放置的標本應該冷凍儲存,最好在-70 ℃,但是某些抗原檢測試劑盒提示-20 ℃冷凍也可接受。