腹瀉病毒的直接檢測(cè)

簡(jiǎn)介

有幾種不同的檢測(cè)方法可以被用來(lái)直接檢測(cè)臨床標(biāo)本中的腹瀉病毒，包括電子顯微鏡法、抗原檢測(cè)法和核酸檢測(cè)法。根據(jù)檢測(cè)條件、當(dāng)?shù)厝藛T的專業(yè)背景和實(shí)驗(yàn)室設(shè)施不同，這些不同檢測(cè)方法在不同診斷實(shí)驗(yàn)室中使用范圍不同。

材料與儀器

器材：
①一次性無(wú)菌手套
②標(biāo)本采集管
③電子顯微鏡、PCR儀
④培

試劑：
①材料：待采標(biāo)本
②PBS緩沖液
③培養(yǎng)基

步驟

腹瀉病毒的直接檢測(cè)基本方法有如下幾種：

1．電子顯微鏡法 電鏡的敏感度可以通過(guò)使用高價(jià)免疫血清聚集病毒來(lái)提高（即免疫電鏡），但是即使采用了這種改良的方法，檢測(cè)的敏感度也僅限于大約每毫升10～106個(gè)病毒顆粒。據(jù)報(bào)道，電鏡檢查僅在不超過(guò)50％ 的急性諾如病毒感染患者中呈陽(yáng)性，對(duì)于輪狀病毒的檢測(cè)敏感性不如酶免疫實(shí)驗(yàn)（EIA）。

2．抗原檢測(cè) 對(duì)每種腹瀉病毒都有已經(jīng)上市的抗原檢測(cè)試劑。使用的檢測(cè)方法有多種，包括固相EIA，免疫色譜法和乳膠凝聚試驗(yàn)。固相EIA可以在臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，通常在2個(gè)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果。免疫色譜法和乳膠凝聚試驗(yàn)簡(jiǎn)單易行，不到30分鐘就可以出結(jié)果，但是在有些報(bào)告中，乳膠凝聚試驗(yàn)的敏感性（70％ ～90％ ）低于其他檢測(cè)方法（＞90％ ）。

3．核酸的檢測(cè) 最常用的是PCR法，但是對(duì)于RNA病毒，核酸序列依賴性擴(kuò)增技術(shù)（NASBA）也有使用。在核酸擴(kuò)增中，糞便標(biāo)本中經(jīng)常存在抑制PCR反應(yīng)體系中酶的活性的物質(zhì)，妨礙病毒核酸的檢測(cè)。將糞便稀釋成10％ 的懸液后，將標(biāo)本加熱至95 ℃，從病毒衣殼中釋放出核酸；使用這種方法時(shí)，加熱后必須立即對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，以避免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致核酸降解。

另一種方法是使用變性劑，例如硫氰酸胍，該方法需要額外的操作步驟，但是核酸提取物不易在分析前快速降解。現(xiàn)在有許多商品化試劑盒可以從糞便標(biāo)本中有效地提取病毒核酸。還可以向提取的標(biāo)本中加入一種內(nèi)控品對(duì)照核酸，這是一種能識(shí)別是否存在抑制物的常用方法。