α 突觸核蛋白原子力顯微鏡（AFM）實驗操作步驟（適用于 tau, Aβ 等其他活性蛋白）

材料與儀器

材料：過濾消毒的 dH2O、新鮮切割的云母、0.1% 聚-L-賴氨酸、吸水紙、真空濃縮儀（Vacufuge）

儀器：原子力顯微鏡

步驟

此方法描述了一般 AFM 樣品制備和成像。具體參數可能因成像的蛋白質樣本及其緩沖液成分而異。

1. 1-5mg/mL 的蛋白質樣品在過濾消毒的 dH2O 的中稀釋 1/10 至 1/100 然后將 20uL 滴到新鮮切割的云母上（12mm，V1）。樣品在室溫下孵育 10-20 分鐘。

注：有些樣品不容易粘在云母上；在這種情況下，用 0.1% 聚-L-賴氨酸預處理新鮮切割的云母，用過濾消毒的 dH2O 洗滌，并在添加樣品前干燥。

2.將 100uL 過濾消毒的 dH2O 添加到表面并使用干凈的吸水紙吸走，以洗去鹽分。總共重復 2-5 次。

3.使用真空濃縮儀（Vacufuge）在室溫下真空干燥云母上的洗滌樣品 5-10 分鐘，直到所有液體蒸發。

4.然后在 AFM 儀器上使用 ACSTA 針尖在輕敲模式下對樣品進行成像，自由振幅為 500mV，Z 控制器設定值為 55%。